Desenvolvimento de técnicas e metodologias para a clivagem enzimática de anticorpos monoclonais e policlonais contra antígenos alvos a partir de análises de biologia estrutural e dinâmicas biofísicas

• Processo: 23/01494-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2023
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2024
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Acordo de Cooperação: SEBRAE-SP
• Pesquisador responsável: Raul de Macedo Queixada
• Beneficiário: Victor Bolsanelli Cioffi
• CNAE: Serviços de engenharia
• Vinculado ao auxílio: 22/08231-0 - Desenvolvimento e validação de um sistema point of care para medição do nível de troponina cardíaca no sangue, AP.PIPE
• Assunto(s): Nanotecnologia Cardiologia Diagnóstico Biomarcadores Infarto Point of care Troponina Síntese proteica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Biomarcador | Cardiologia | diagnóstico | infarto | point of care | Troponina | Síntese proteica

Resumo

A partir de anticorpos monoclonais e policlonais, específicos contra antígenos alvo, testes de clivagem enzimática por pepsina e papaína serão realizados com o intuito de se obter a máxima eficácia da reação e gerar fragmentos Fab e F(ab)2 em alto teor de rendimento. Metodologias de cromatografia serão utilizadas para a obtenção dos fragmentos individualizadas, como filtração em concentradores com cutoff de 30kDa, uso de resinas conjugadas a proteína A e colunas de exclusão molecular por tamanho. Os antígenos serão produzidos de forma heteróloga em procariotos, após análises de bioinformática com o uso de softwares especializados, concomitantemente análises de expressões, selecionando cepas, tampões, técnicas de lise, metodologias de cromatografia e polimentos por cromatografia por tamanho. Após a produção das proteínas e clivagem dos anticorpos, testes de imunorreatividade serão realizados por metodologias de ELISA e Western Blotting, validando a eficácia de reconhecimento antígeno-anticorpo e também verificando a titulação de reconhecimento. Posteriormente a conclusão dos processos, o aumento gradual de escala será implementado diretamente proporcional a demanda. (AU)