Formação, estabilidade e toxicidade de vesículas pequenas unilamelares no co-cultivo de embriões bovinos produzidos in vitro

• Processo: 23/06884-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2023
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2024
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Marcelo Fábio Gouveia Nogueira
• Beneficiário: Melissa Nishida Hirano
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências e Letras (FCL-ASSIS). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Assis. Assis , SP, Brasil
• Assunto(s): Técnicas in vitro
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: embrião bovino | embriotoxicidade | fosfoinositídeo | lipossomo | produção in vitro | vesícula lipídica unilamelar | produção in vitro de embriões bovinos

Resumo

Dentro da biotecnologia da reprodução animal assistida, a produção in vitro de embriões (PIVE) bovinos é um destaque nacional. Contudo a técnica induz a alterações iatrogênicas nos embriões produzidos. Marcadamente, isso é refletido na criotolerância dos embriões produzidos in vitro (PIV) e em sua composição alterada de lipídios na membrana plasmática e no citoplasma. Dentre as mais recentes abordagens para modular os lipídeos de embriões PIV, estão as vesículas lipídicas sintéticas (i.e., lipossomos). O objetivo deste estudo é validar a formação e determinar a estabilidade e a toxicidade de vesículas pequenas unilamelares (SUVs) co-cultivadas com embriões bovinos PIV. Serão testadas formações de SUVs com colesterol (35 a 37,5 %), fosfatidilcolina dipalmitoil (60 %) e fosfoinositídeos (2,5 a 5 %) em meio de cultivo embrionário comercial. O diâmetro será homogeneizado via sonicação e extrusão. A estabilidade das SUVs (1 nmol/L) será analisada em 0, 24 e 48 horas (tempo de incubação), em condições de cultivo embrionário e mediante o espalhamento dinâmico de luz (DLS). Finalmente, a toxicidade será avaliada mediante a produção de blastocistos (nos dias 7, 8 e 9 de cultivo) co-cultivados por 48 a 96 horas com 0 (controle), 1, 2 e 3 nmol/L de SUVs. Serão escolhidas as SUVs com a melhor estabilidade (em 48 horas de incubação) e, preferencialmente, aquelas que contenham 5% de fosfoinositídeos em sua composição.