Técnicas de inserção direcionada de transgenes humanos em linhagens clonais de fibroblastos fetais suínos para transferência nuclear objetivando produção de animais aptos para xenotransplante

• Processo: 23/11983-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2023
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2024
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Humana e Médica
• Pesquisador responsável: Silvano Mario Attilio Raia
• Beneficiário: Gustavo Torres de Souza
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 21/11872-5 - Centro de Ciência para o Desenvolvimento em Xenotransplante, AP.CCD
• Assunto(s): Suínos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Geneticamente modificadas | Suínos | xenotransplante | Xenotransplante

Resumo

O xenotransplante vem alcançando grandes progressos nos últimos anos, sobretudo após o aperfeiçoamento das tecnologias de manipulação gênica. Nesse contexto, a utilização de porcinos como fonte doadora de órgãos tem ganhado destaque devido às vantagens reprodutivas e às semelhanças anatômicas e fisiológicas com primatas. Entretanto, apesar dos benefícios propiciados pelo modelo suíno, o transplante de órgãos para humanos enfrenta complexas barreiras imunológicas. Esse cenário é composto por cascatas de resposta imune inata e adaptativa, somadas a disfunções da coagulação e processos inflamatórios que, em diferentes níveis, envolvem o recrutamento de anticorpos naturais, ativação de linfócitos T, células NK e macrófagos. Dentre os fatores que sinalizam nas vias de rejeição do órgão, destacam-se o PDL1 e o CD47, atuantes na regulação da resposta imune celular, o CD46, modulador do sistema complemento, a HO-1 e a TBM, proteínas envolvidas nos processos de inflamação e coagulação. Ensaios in vitro e in vivo demonstraram que a expressão transgênica desses genes humanos em porcos conferiu menor imunogenicidade e maior proteção imunológica aos órgãos transplantados. Neste contexto, nosso grupo com o uso do sistema de eletroporação Neon, trasfectou vetores do transposon piggyBac contendo as ORFs dos genes humanos supracitados em células suínas editadas triplo-nocaute (TKO) dos genes GGTA1, BGalNT2 e CMAH. Com base nisso o presente trabalho avaliará in vitro, se a indução da expressão de transgenes humanos reguladores das cascatas de eventos durante a rejeição imunológica possibilitará diminuir ou, até mesmo, abolir a ativação dessas cascatas.