Desenvolvimento de metodologia de calibradores e aprimoramento de técnicas para clivagem e conjugação de anticorpos em dispositivo point of care para medição de troponina cardíaca no sangue.

• Processo: 23/12935-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2023
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2025
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina
• Pesquisador responsável: Paulo Henrique Garcia de Sá
• Beneficiário: Tamires Alves Nunes
• CNAE: Serviços de engenharia
• Vinculado ao auxílio: 23/02375-3 - Desenvolvimento e validação de um sistema point of care para medição do nível de troponina cardíaca no sangue, AP.PIPE
• Assunto(s): Biomarcadores Cardiologia Diagnóstico Infarto Point of care Troponina
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Biomarcador | Cardiologia | diagnóstico | infarto | point of care | Troponina | Diagnóstico in-vitro

Resumo

O sensor é fornecido em um cartucho consumível, formado por um encapsulamento plástico que protege o nanofilme e com um ponto de inserção de amostras de sangue total por seringas comuns. O nanofilme, por sua vez, é modificado com anticorpos específicos para o antígeno marcador de insuficiência cardíaca. Na primeira fase do projeto, anticorpos monoclonais e policlonais foram clivados estrategicamente, de maneira a expor grupos funcionais com alta afinidade pela superfície do nanofilme. Neste momento, visando otimizar as condições para aumento da escalabilidade do processo, necessita-se estudar criteriosamente os protocolos adotados para modificação, de maneira a avaliar parâmetros que possam ser melhorados, aperfeiçoando o protocolo reprodutível de sensores, com alto reconhecimento de baixas concentrações de troponina (sensibilidade), e com baixa interferência de outros componentes do soro, através de moléculas bloqueadoras adicionadas à formulação dos sensores. E, sobretudo, avaliar os efeitos das estratégias aperfeiçoadas para produção de filmes finos e direcionamento das biomoléculas a partir de campos elétricos externos, sobre a performance do sensor. Para isso, deverão ser realizadas caracterizações dos sensores planejados a partir de técnicas teóricas de Dinâmica Molecular e experimentos de caracterização de Biologia Molecular, de maneira a avaliar critérios como homogeneidade da camada de funcionalização sobre o nanofilme, estabilidade e armazenamento.Será construído um kit de calibração do equipamento, utilizando sistemas macromoleculares análogos aos anticorpos, que mimetizem a alteração do sinal SPR visualizado quando ocorre interação específica antígeno-anticorpos. Esse kit será crucial para calibração rotineira do equipamento, não exigindo necessidade de dispêndio de sensores descartáveis e estoques consumíveis de proteína.A hidroxietilcelulose é um polímero utilizado para desenvolvimentos de materiais como biofilmes para revestimento formulações de cápsulas de medicamentos. É um composto derivado da celulose e que forma uma película e apresenta um índice de refração parecido ao da água. Frente a isso, este polímero será testado em diferentes concentrações para o desenvolvimento de calibradores poliméricos, a fim de analisar o deslocamento no sinal de SPR, em intensidade equiparável às variações de sinal observadas com diferentes concentrações de troponina T, em equipamento óptico. Além do mais, desenvolver protocolos de otimização de clivagem enzimática por pepsina de anticorpos policlonais e monoclonais para interação com superfície em nanofilmes , ajustar protocolos para correções de interferências durante os testes e análises estatísticas. Por fim, produção em larga escala de biossensores funcionalizados com anticorpos e bloqueadores e funcionalizados com calibradores, para posterior testes clínicos.