Detecção de Carbapenemases em Isolados Clínicos: Desenvolvimento de Testes de Aglutinação como Alternativa Diagnóstica

• Processo: 23/12960-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2024
• Situação: Interrompido
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Microbiologia Aplicada
• Pesquisador responsável: Ana Cristina Gales
• Beneficiário: André Valêncio Siqueira
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Bolsa(s) vinculada(s): 24/13835-8 - Desenvolvimento e validação de uma plataforma de diagnóstico baseada em CRISPR-Cas12 para detecção rápida de genes codificadores de carbapenemase, BE.EP.DR
• Assunto(s): Carbapenemases Diagnóstico Testes imediatos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Aglutinação em látex | carbapenemase | diagnóstico | teste rápido | Diagnóstico

Resumo

O tratamento de BGN produtores de carbapenemases conta com a associação de b-lactâmicos já utilizados na prática clínica e novos inibidores de carbapenemases. Devido o espectro de ação seletiva entre as carbapenemases, torna-se necessário a diferenciação das carbapenemases para a prescrição adequada de antimicrobianos. Porém, a falta de testes rápidos tem dificultado a instituição a prescrição da antibioticoterapia adequada, aumentando os custos hospitalares, índices de resistência e mortalidade dos pacientes. O teste de aglutinação em látex tem como princípio a ligação antígeno-anticorpo (Ag-Ac) conjugado a nano moléculas de látex, que ao contato com o antígeno de interesse, desencadeia uma reação de aglutinação. Os testes de aglutinação são rápidos (em torno de 3 minutos), de fácil execucão e sem a necessidade de equipamento ou técnico especializado para a sua realização. Diferentes testes de aglutinação estão disponíveis para reconhecimento de distintos antígenos clinicamente relevantes em doenças infecciosas; porém, não existem testes de aglutinação comercialmente disponívies para a detecção de carbapenemases. Sendo assim, nosso objetivo é o desenvolvimento, padronização e validação de um teste rápido na plataforma para testes de aglutinação em látex com base na epidemiologia de resistência aos antimicrobianos presentes no território nacional. Para alcançar estes objetivos selecionaremos 4 enzimas carbapenemases de interesse clínico presentes na epidemiologia brasileira, sendo elas: KPC-2, KPC-160, NDM e OXA-23. Os genes destas enzimas serão confirmados e, posteriormente, clonados em um vetor de expressão. Logo após as enzimas serão expressas e purificadas. Serão produzidos anticorpos policlonais a partir da imunização de coelhos Nova Zelândia. Os anticorpos serão purificados em colunas de afinidade, e conjugado em partículas de látex. Diferentes metodologias de preparo de amostras serão testadas para otimização e rápida realização do teste. Para a validação será utilizada diferentes cepas de enterobactérias produtoras e não produtoras de carbapenemases e a avaliação com teste-cego de amostras clínicas. Com os resultados obtidos apresentaremos um novo teste rápido para a detecção e diferenciação de carbapenemases, baseado na epidemiologia mundial das carbapenemases produzidas por enterobactérias. Esperamos que este teste seja barato, de fácil realização e que possa ser disponibilizado para os laboratórios clínicos.