Suplementação de citocinas em oócitos suínos durante maturação in vitro para geração de embriões clones saudáveis

• Processo: 24/09696-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2024
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2026
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Animal
• Pesquisador responsável: Silvano Mario Attilio Raia
• Beneficiário: Debora Rodrigues Lopes
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 21/11872-5 - Centro de Ciência para o Desenvolvimento em Xenotransplante, AP.CCD
• Assunto(s): Embrião
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: embriões | genética | Xenotransplantes | Xenotransplante

Resumo

A obtenção de embriões clones viáveis in vitro para a produção de porcos geneticamente modificados depende de um amplo domínio de tecnologias de reprodução. Apesar da constante otimização dos protocolos de maturação (MIV) e cultivo in vitro (CIV) de embriões, a eficiência de produção de embriões suínos geneticamente modificados ainda é baixa, em boa parte devido à baixa qualidade e competência de desenvolvimento dos oócitos maturados. In vivo, oócitos imaturos e as células do cúmulus que os circundam(complexo cúmulus-oócito, COC) mantêm uma comunicação bidirecional essencial para a ativação da via de sinalização MAPK3/1 que contribui para que o oócito gradualmente atinja a maturação nuclear e citoplasmática necessária para o desenvolvimento embrionário. A produção de embriões suínos in vitro, por sua vez, é conhecida por estar associada a menor qualidade e viabilidade quando comparados aos embriõesgerados in vivo (menor quantidade de células, apoptose e perfil epigenético aberrante). No entanto, melhora significativa tem sido obtida com o aprimoramento dos meios de cultivo e técnicas de manipulação. Neste projeto propomos a suplementação do meio de maturação com 3 citocinas: FGF2, LIF e IGF1 (FLI). Associadaa maior ativação das vias MAPK3/1 e PI3K/AKT nas células do cúmulus. Estudos mostram que a suplementação com tais fatores durante a maturação in vitro melhora as taxas de maturação completa e aumenta a competência de desenvolvimento do oócito, e consequentemente aumenta a capacidade de produzir mais embriões no estágio de blastocisto. De modo geral, observa-se a necessidade de melhora na qualidade dosembriões clones obtidos. Visto que a reprogramação epigenética aberrante é tida como a principal causa da baixa qualidade dos embriões clones, neste projeto propomos a utilização de moduladores epigenéticos (como Scriptaid) como um método para melhorar a reprogramação nuclear da célula somática utilizada na reconstrução do oócito, para a obtenção de embriões clones de melhor qualidade. Além dos interessesmencionados, a criopreservação de oócitos e/ou embriões é um elemento relevante para o projeto, podendo ser utilizado como indicador de qualidade. Durante todo o desenvolvimento do projeto, a bolsista auxiliará na manutenção do arcabouço regulatório necessário para a certificação do laboratório, além de fornecer suporte na gestão da qualidade.