Efeito das biotécnicas de sexagem, acondicionamento e vitrificação de embriões equinos pré-implantacionais produzidos in vivo sobre a viabilidade embrionária

• Processo: 22/14517-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2024
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2026
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Cezinande de Meira
• Beneficiário: Giovana Siqueira Camargo
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Assunto(s): Criopreservação DNA Transporte
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Colapso manual | Criopreservação | Dna | Fluído da blastocele | Transporte | Biotecnologia da Reprodução Equina

Resumo

O desenvolvimento de biotecnologias na produção in vitro de embriões equinos, inovam frequentemente, entretanto a produção in vivo de embriões ainda possui um maior impacto na indústria equestre. As biotécnicas aplicáveis aos embriões produzidos in vivo, como acondicionamento, vitrificação e sexagem se tornam importantes estratégias, que potencializam os programas transferência de embriões (TE). Entretanto, devido às características do embrião equino, poucos estudos e/ou custo para aplicação das técnicas, limitam suas aplicações. O objetivo da pesquisa é avaliar o efeito do uso de biotécnicas de baixo custo no acondicionamento, vitrificação e sexagem de embriões pré-implantacionais sobre a viabilidade embrionária e que sejam aplicáveis à rotina do campo. Serão utilizados 49 embriões equinos no estágio de blastocisto expandido, divididos aleatoriamente em sete grupos experimentais com n de 7 embriões/grupo, sendo: Grupo Íntegro (I) - embriões íntegros submetidos às análises imediatamente após a colheita; Grupo Integro-Acond 25ºC (I25) e Grupo Integro-Acond 32ºC (I32)- embriões íntegros e submetidos às análises pré e pós acondicionamento por 24 h em temperatura ambiente e a 32ºC, respectivamente; Grupo Colapso (C) - embriões perfurados manualmente com micro-agulha vidro de 50 µm e submetidos às análises imediatamente pré e pós o colapso; Grupo Colapso-Acond 25ºC (C25) e Grupo Colapso-Acond 32ºC (C32) - embriões perfurados manualmente com micro-agulha vidro de 50 µm e submetidos às análises pré e pós acondicionamento por 24h em temperatura ambiente e a 32ºC, respectivamente; Grupo Vitrificação (VIT) - embriões perfurados manualmente com micro-agulha vidro de 50 µm e submetidos às análises pré e pós vitrificação/desvitrificação. Após a colheita dos blastocistos expandidos de oito dias (D8), selecionados em uma faixa de até 1.200µm, em laboratório será realizado previamente uma avalição morfológica de todos os embriões. Aqueles com a etapa de colapso serão perfurados manualmente com a micro-agulha de vidro com aproximadamente 50µm. O fluido da blastocele (FB) extravasado dos embriões colapsados será utilizado como amostra de material genético para sexagem por qPCR. Os embriões serão submetidos a dois tipos de armazenamento, acondicionados à ambiente e a 32ºC por 24h em caixas isotérmicas, e vitrificados após o colapso ao procedimento de vitrificação e desvitrificação. E para análise da viabilidade embrionária após as biotecnologias aplicadas, todos os embriões serão avaliados morfologicamente e por analise de proteômica.