Estudos estruturais sobre a regulação da produção do ácido ascórbico (Vitamina C): a interação entre a proteína regulatória PAS/LOV e a enzima GDP-L-Galactose fosforilase (GGP)

• Processo: 24/15657-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2024
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2025
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Biofísica - Biofísica Molecular
• Pesquisador responsável: Richard Charles Garratt
• Beneficiário: Beatriz Lecce Manzo
• Instituição Sede: Instituto de Física de São Carlos (IFSC). Universidade de São Paulo (USP). São Carlos , SP, Brasil
• Assunto(s): Ácido ascórbico Cristalização Interação proteína-proteína Biologia estrutural
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: ácido ascórbico | Cristalização | GDP-L-Galactose fosforilase (GGP) | Interação proteína-proteína | Lov | Myrciaria dubia (camu-camu) | Pas | Biologia Estrutural

Resumo

O ácido ascórbico é essencial para a saúde, especialmente por sua ação antioxidante. Para alguns animais, como os primatas, as plantas são a principal fonte devido à falta de uma enzima na via de síntese. Assim, destaca-se a Myciaria dubia (Kunth) McVaugh, planta nativa da Amazônia que possui de 0.96 à 2.99 gramas de ácido ascórbico por 100 gramas de polpa. A via metabólica de síntese de ácido ascórbico em plantas, nomeada como Smirnoff-Wheeler, é a mais bem caracterizada em termos celulares e fisiológicos. Porém, estudos estruturais ainda precisam ser realizados para entender os mecanismos moleculares de regulação e síntese do ácido ascórbico. Dentre as seis enzimas envolvidas nessa via, a GDP-L-Galactose fosforilase (GGP) é proposta como principal ponto de controle. Estudos in vivo e in vitro demonstraram a interação entre essa enzima com a proteína regulatória PAS/LOV. Esse trabalho propõe, então, estudar e caracterizar a PAS/LOV e o complexo entre ela e a GGP. Para atingir tais objetivos, as proteínas GGP e PAS/LOV foram clonadas no plasmídeo pET28+ e pETDuet, respectivamente, e a proteína GGP será posteriormente subclonada no vetor pETDuet, para co-expressão das proteínas. Com as proteínas purificadas, ensaios de atividade enzimática da GGP será analisada na presença e ausência da PAS/LOV. Por fim, as caracterizações biofísica e estrutural serão feitas mediante SEC-MALS, dicroísmo circular, termoforese em microescala e ensaios de cristalização.