Caracterizando linhagens transgênicas de drosófila com mitocôndrias engenheiradas

• Processo: 25/02024-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2025
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2026
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Metabolismo e Bioenergética
• Pesquisador responsável: Marcos Túlio de Oliveira
• Beneficiário: Nathane Rosa Rodrigues
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 21/06711-2 - Modulação do crescimento tecidual e acúmulo de biomassa pela oxidase alternativa mitocondrial, AP.JP2
• Assunto(s): Respirometria Metabolismo mitocondrial
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: drosófila | respirometria | Metabolismo mitocondrial

Resumo

O projeto tem como objetivo avaliar a expressão, localização e função dos transgenes porina-HA e Gpo1 em Drosophila, além de examinar a viabilidade das linhagens transgênicas e seus parâmetros de bioenergética mitocondrial. Para isso, linhagens foram geradas por microinjeção dos vetores pUAST-porin-HA e pUAST-Gpo1, recombinados em sítios específicos no genoma de D. melanogaster, e os indivíduos transgênicos foram selecionados para estabelecimento de linhagens estáveis. A caracterização das linhagens incluirá a confirmação da inserção dos transgenes por PCR do DNA genômico, cruzamentos com drivers GAL4 específicos para controle espacial e quantitativo da expressão desses transgenes, e quantificação da transcrição via PCR quantitativo. A análise proteica será realizada por western blot utilizando anticorpos anti-HA, anti-porina e anti-Gpo1, enquanto imunomarcação e microscopia confocal serão empregadas para determinar a localização subcelular das proteínas. Ensaios funcionais incluem avaliação da viabilidade larval e pupal, respirometria de alta resolução para medir a taxa de consumo de oxigênio em mitocôndrias isoladas de tecidos específicos utilizando anticorpo anti-HA para comparação com organelas purificadas diretamente de tecidos dissecados. Os resultados permitirão o desenvolvimento de duas ferramentas moleculares essenciais para o projeto JP2, com potencial impacto na comunidade científica dedicada ao estudo de mitocôndrias e Drosophila, fornecendo novos insights sobre o metabolismo energético nesse modelo experimental.