Geração de linhagens para degradação condicional das proteínas ER ATF-6 e PEK-1 em Caenorhabditis elegans

• Processo: 25/03832-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2025
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2026
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Metabolismo e Bioenergética
• Pesquisador responsável: Fernanda Marques da Cunha
• Beneficiário: Carolina Gomes de Assis
• Supervisor: Daphne Selvaggia Cabianca
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: German Research Center for Environmental Health, Alemanha
• Vinculado à bolsa: 21/05350-6 - Estudo do impacto da deficiência de LIPL-5 sobre a UPR de retículo endoplasmático e sua relação com a atividade mitocondrial de Caenorhabiditis elegans, BP.DR
• Assunto(s): Caenorhabditis elegans Mitocôndrias
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Auxin-Inducible Degron | Caenorhabditis elegans | endoplasmic reticulum | mitochondria | stress response | Metabolismo e Bioenergética

Resumo

A interação física e funcional entre mitocôndria e retículo endoplasmático (RE) é crucial para a resposta celular ao estresse e impacta profundamente a atividade de ambas as organelas. Durante situações de estresse, organismos ativam respostas adaptativas, como a resposta a proteínas mal enoveladas (UPR), na tentativa de restaurar a homeostase. A atividade mitocondrial de Caenorhabditis elegans muda em resposta à privação de alimentos, um estresse nutricional. Nós hipotetizamos que a resposta UPRre pode estar envolvida nas mudanças induzidas pela privação alimentar no fenótipo mitocondrial. Para abordar essa questão, precisamos de animais com ativação prejudicada de cada uma das vias UPRre. Trabalhar com mutantes de deleção é direto, mas pode mascarar possíveis diferenças, uma vez que mecanismos compensatórios podem ser ativados para superar a ausência funcional de proteínas importantes, especialmente durante o desenvolvimento. Assim, decidimos tentar uma abordagem diferente. O sistema Auxin-Inducible Degron (AID) fornece controle espaço-temporal reversível para a redução de proteínas alvo, evitando que mecanismos compensatórios sejam ativados. Assim, o objetivo deste projeto é gerar linhagens de C. elegans que permitam a depleção das proteínas do RE PEK-1 e ATF-6 usando o sistema AID. Durante o período coberto por esta proposta, definiremos a estratégia de inserção da marcação AID, geraremos C. elegans marcados com AID via CRISPR/Cas9, introduziremos TIR1 de Arabidopsis thaliana e validaremos a degradação de proteína induzida por auxina para duas linhagens, uma cujo alvo é PEK-1 e a outra ATF-6.