Avaliação da taxa de polispermia até 28 horas após a inseminação in vitro de oócitos em suínos

• Processo: 00/01879-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2000
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2001
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: José Antonio Visintin
• Beneficiário: Melissa Savoia Castilho Cunha
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Fertilização in vitro Oócitos Suínos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Fecundacao In Vitro | Oocito | Polispermia | Suinos

Resumo

Este trabalho terá como proposta avaliar a taxa de polispermia após a fecundação in vitro de oócitos em suínos. Ovários de suínos serão colhidas em abatedouro e transportados para o Laboratório da FMVZ-USP. Os folículos serão aspirados e os oócitos maturados no Meio NCSU23 por 48 horas. Após 48 horas, os oócitos maturados serão lavados e colocados em gotas de 200μl do Meio de Fecundação TbM suplementado com cafeína para fecundação in vitro. O sêmen fresco de cachaços será diluído com BTS a 37°C e centrifugado para separar os espermatozóides vivos e mortos, bem como o líquido seminal e o diluidor. Os espermatozóides serão ressuspendidos e incubados para capacitação no Meio de Fecundação por 90 minutos em estufa a 39°C. Em seguida serão adicionados 200μl da suspensão de espermatozóides a cada gota que contém os oócitos, para fecundação, sendo mantidos nas estufas por 8 horas em duas temperaturas (37 ou 39°C). O desenvolvimento e a taxa de polispermia serão avaliados pela coloração com orceína dos oócitos a cada quatro horas até 28 horas após a inseminação. Após oito horas da inseminação, metade dos oócitos será lavada e colocada em gotas de 100μl do Meio de Cultivo NCSU23 suplementado com BSA e a outra metade permanecerá no Meio de Fecundação, permanecendo em estufas à 37 ou 39°C. Após 18 horas da inseminação, com auxílio de pipeta Gilson serão retiradas as células dos cúmulos de todos os oócitos, colocando-os em gotas de 100μl do Meio de Cultivo e mantendo por mais 10 horas em estufa a 37 ou a 39°C. (AU)