Efeito de flavonóides na atividade de proteína tirosina fosfatase determinada através de método contínuo

• Processo: 03/04174-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2003
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2003
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Enzimologia
• Pesquisador responsável: Hiroshi Aoyama
• Beneficiário: Camila de Andrade Camargo
• Instituição Sede: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Substratos Flavonoides Proteínas tirosina fosfatases
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Fenilfosfato | Flavanoides | Metodo Continuo | Proteina Tirosina Fosfatase

Resumo

O substrato mais utilizado na determinação de quaisquer fosfatases, sejam elas ácidas ou alcalinas, é o p-nitrofenilfosfato (pNPP), uma vez que o produto liberado, o p-nitrofenol, possui cor amarela, em meio alcalino, que pode ser detectado no comprimento de onda de 405 nm. A outra alternativa de dosagem de fosfatase é através da determinação do fosfato inorgânico liberado/que em presença de molibdtato de amônio e de um redutor, forma o azul de molibdênio que absorve no comprimento de onda de 660 a 700 nm. Em quaisquer dos dois casos, controles mais rigorosos tornam-se necessários quando se quer verificar o efeito de compostos coloridos, como, por exemplo, os flavonóides (cor amarelada). O presente projeto tem como objetivos estudar as melhores condições para a implementação de um método contínuo de determinação da atividade de fosfatase ácida, sem a necessidade de paralização da reação e da utilização de pNPP como substrato. Isto pode ser feito utilizando-se fenilfosfato como substrato, e seguindo-se a formação de fenol espectrofotometricamente, através de um espectrofotômetro com arranjo de diodos e de um software adequado. Utilizando-se este método contínuo, e proteína tirosina fosfatase, de baixa massa molecular de rim bovino, como enzima, serão estudados efeitos de flavonóides, com determinação de parâmetros cinéticos. (AU)