Estrutura, especificidade e mecanismos secretores de enzimas digestivas de coleoptera e hemiptera.

• Processo: 99/10574-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de janeiro de 2000
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2002
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Enzimologia
• Pesquisador responsável: Walter Ribeiro Terra
• Beneficiário: Plinio Tadeu Cristofoletti Junior
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 98/10458-2 - A digestão nos insetos: uma abordagem molecular, celular, fisiológica e evolutiva, AP.TEM
• Assunto(s): Secreção Amilases Insetos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Amilase | Aminopeptidase | Cisteina Proteinase | Inseto | Secrecao | Sitio Ativo

Resumo

Este projeto compreende o estudo de proteases e glicosidases do Coleoptera Tenebrio molitor e das principais enzimas digestivas do Homoptera Acyrthosiphon pisum. Uma cisteina proteinase solúvel e uma aminopeptidase ligada à membrana de T. molitor serão clonadas, seqüenciadas, expressas em bactérias e caracterizadas quanto à especificidade dos subsítios e, se favorável, mutantes sítio dirigidas serão obtidas. Serão produzidos anticorpos em coelho para a aminopeptidase purificada de T. molitor e para a cisteina proteinase recombinante. Estes anticorpos, juntamente com um terceiro contra a aminopeptidase de A pisum, já purificada, serão usados em estudos de imunocitolocalização para definir os seus mecanismos de secreção. A secreção de amilase digestiva de Zabrotes subfasciatus também será estudada com anticorpos já produzidos. Finalmente, uma amilase digestiva, duas alfa-glicosidases e uma trealase de T. molitor, já purificadas, também serão caracterizadas cineticamente. (AU)