Transgenia animal: uso de espermatozóides como carreadores de DNA em estudo de produção de bovinos transgênicos

• Processo: 00/00455-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2000
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2001
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: José Antonio Visintin
• Beneficiário: Mayra Elena Ortiz D' Avila Assumpcao
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Bovinos | Capacitacao Espermatica | Eletroporacao | Espermatozoide | Lipofeccao | Transgenia

Resumo

Este trabalho terá como objetivo avaliar o uso de espermatozóides como carreadores de DNA exógeno na produção de bovinos transgênicos. O DNA será introduzido nos espermatozóides por capacitação espermática, lipofecção e eletroporação, empregando na primeira etapa o DNA peGFP-N1 e na segunda etapa o DNA do gene bovino da alfa-lactoalbumina. Os espermatozóides serão capacitados com 5uM de cálcio ionóforo e colocados em solução contendo 500ng de DNA. Na lipofecção, os lipossomos serão incubados com DNA e, em seguida, colocados em contato com os espermatozóides. Para a eletroporação, os espermatozóides serão colocados em câmara de eletrofusão contendo DNA e submetidos a três pulsos elétricos de 8KV/cm durante 5useg. Na primeira etapa, os embriões serão avaliados quanto à presença do DNA pela fluorescência e os positivos transferidos para receptoras. A taxa de integração será mensurada pelo número de fetos que apresentarem coloração verde sob o número de embriões transferidos. Na segunda etapa, os embriões serão biopsiados e as amostras submetidas a técnica de PCR para avaliar a integração do DNA. Os embriões positivos serão transferidos para receptoras pelo método não cirúrgico e a gestação acompanhada por exames ultra-sonográficos mensais. A integração do DNA será verificada pela técnica Southern-blot, utilizando-se sangue dos bezerros recém-nascidos. (AU)