Identificação e caracterização de um novo sítio de interação de citocromo C com vesículas que mimetizam a membrana mitocondrial interna

• Processo: 04/15529-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2005
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2007
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
• Pesquisador responsável: Iseli Lourenço Nantes Cardoso
• Beneficiário: Cintia Kawai
• Instituição Sede: Pró-Reitoria de Pesquisa, Pós-Graduação e Extensão e Assuntos Comunitários. Universidade de Mogi das Cruzes (UMC). Mogi das Cruzes , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 98/13659-9 - Atividade peroxidática de citocromos sobre hidroperóxidos, compostos carbonílicos, bases de Schiff e lipídios de membrana: produção de espécies excitadas e radicais livres, AP.JP
• Assunto(s): Citocromos c Membranas mitocondriais Lisina
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cardiolipina | Citocromo C | Fusao De Vesiculas | Lisina | Membrana Mitocondrial Interna | Vesiculas Pcpecl

Resumo

O objetivo do projeto de pesquisa tem como verificar e caracterizar um novo sítio de citocromo c para interação com membranas, formado pelos resíduos de Lisina 22 e 27 e Histidina 26 e 33, além dos já descritos sítios A e C que envolvem Lys 72 e 73 e Asparagina 52, respectivamente. O sítio que engloba as Usinas 22 e 27 interage com vesículas de PCPECL (fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina e cardiolipina), de forma pH dependente, sendo a interação favorecida pelo abaixamento do pH na faixa de 7,4 - 6,2. Esta faixa de pH foi escolhida porque ocorre um abaixamento de 1,4 unidades de pH no espaço intermembranas com a formação do potencial de membrana mitocondrial. Pretendemos doravante complementar o projeto com os seguintes experimentos: I) verificar a associação de citocromo c nativo e citocromo c com sítio L bloqueado por dietilpirocarbonato (DEPC) com a membrana de mitoplastos de fígado de rato depletados de citocromo c e repetir este experimento somente com citocromo c nativo em pH ácido, isto é 6,2 e em pH alcalino, 8,0. II) testar a influência de ceramidas e derivados no processo de fusão de vesículas de PCPECL mediada por citocromo c III) investigar a interação de citocromo c nativo e modificado por DEPC com vesículas de PCPECL, por meio de medidas de SRP (surface plasmon resonance) IV) testar a interação de citocromo c com membranas de PCPECL, utilizando a proteína extraída de atum. (AU)