Estudo do papel de um homólogo de VirB2 em Staphylococcus aureus

Resumo

Em uma era de crescente aumento de resistência a agentes antimicrobianos e surgimento de bactérias multirresistentes, a transferência de plasmídeos por conjugação tem relevância destacada. Este processo, já caracterizado por muitos anos como mediado por um tipo especializado de sistema de secreção tipo IV (T4SS), foi relativamente menos explorado em bactérias Gram-positivas. Recentemente, análises de bioinformática feitas em nosso grupo de pesquisa revelaram que, ao contrário do que a literatura indicava, plasmídeos conjugativos nestes organismos podem também conter homólogos da proteína VirB2 que em Gram-negativas monta o pilus responsável por contatar as células alvos da transferência. Para avaliar a importância desses homólogos de virB2 escolhemos investigar o gene chamado trsB, presente no cluster que codifica o T4SS no plasmídeo pGO1 de Staphylococcus aureus. Pretendemos super expressar uma cópia fusionada com 6×His-tag (já clonada em um vetor induzível em S. aureus) para tentar avaliar se a sua secreção pode ser detectada por Western Blot e se seria dependente da presença de pGO1 na mesma célula. Em uma abordagem complementar, pretendemos utilizar um sistema de silenciamento gênico para S. aureus baseado em interferência CRISPR (CRISPRi) para inibir um regulador do T4SS e desreprimir o sistema, potencialmente facilitando a observação dos fenótipos sendo investigados.