Modelos in vitro para estudos pré-clínicos de melanoma quimioresistente

• Processo: 14/24400-0
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2015
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2017
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Morfologia - Citologia e Biologia Celular
• Pesquisador responsável: Silvya Stuchi Maria-Engler
• Beneficiário: Silvya Stuchi Maria-Engler
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCF). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Pesquisadores associados: Silvia Berlanga de Moraes Barros ; Vinicius de Lima Vazquez
• Assunto(s): Neoplasias cutâneas Melanoma Cultura de células Quimiorresistência
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: cultura de células | Culturas organotípicas | melanoma | métodos alternativos à experimentação animal | pele | quimiorresistência | Métodos alternativos à experimentação animal; biologia molecular

Resumo

O melanoma, embora represente somente 4% das neoplasias malignas da pele, é considerada a mais grave por, geralmente, levar o paciente a óbito em poucos meses. A via MAPK está intimamente ligada ao descontrole da proliferação celular, especialmente em melanoma, por esta razão, esta via se tornou um alvo para o desenvolvimento de terapias direcionadas a oncogenes, assim, potentes quimioterápicos como Vemurafenibe (inibidor de BRAFV600E) e Trametinibe (inibidor de MEK) foram desenvolvidos nos últimos anos e considerados uma esperança para os portadores de câncer do tipo melanoma. Altíssimas taxas de respostas vêm sendo alcançadas, o que evidencia a revolução gerada com os inibidores específicos no tratamento de melanoma avançado. Entretanto, a maioria dos pacientes está sujeito à resistência a estes medicamentos, com recidivas após 7 meses do inicio do tratamento em decorrência à diversos mecanismos secundários, justificando a constante busca por novos compostos terapêuticos que possam superar ou minimizar esta quimiorresistência e, efetivamente levar à cura. Dados recentes de nosso laboratório indicam que os compostos 4-nerolidilcatecol (4-NC) e o fenolato de sódio DM-1 induzem morte celular em melanoma de forma especifica, não induzindo o mesmo efeito em células normais. O composto 4-NC é um potente inibidor proteassomal, enquanto o composto DM-1 induz apoptose dependente de caspase-3. Na presente proposta visamos avaliar a possibilidade de superação da quimiorresistência do melanoma aos inibidores de BRAF e de MEK, através da utilização de terapias combinatórias com 4-NC ou DM-1 em células de melanoma humano resistentes à estas terapêuticas atualmente estabelecidas. Para isto, serão desenvolvidas novas linhagens de melanoma humano resistentes aos inibidores vemurafenibe e trametinibe, que terão seu perfil de resistência confirmado através de ensaios de viabilidade celular (MTT) e western blotting; a citotoxicidade da terapia combinatória será avaliada através de ensaios com azul de tripan; fragmentação e danos no DNA; a investigação dos possíveis mecanismos de ação da citotoxicidade será avaliada com ensaios de atividade proteassomal, autofagia e senescência com análise da interferência da terapia combinatória em processos de invasão e migração celular com modelos em monocamada e tridimensional. Além disso, serão estabelecidas culturas primárias de tumores quimioresistentes provenientes de pacientes do Hospital do Câncer de Barretos, portadores de melanoma, visando testes in vitro com as terapias de 4-NC e DM-1, e possível proposta terapêutica conforme os resultados obtidos. (AU)

Publicações científicas

(10)

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

DE OLIVEIRA, ERICA APARECIDA; DE LIMA, DIOGENES SAULO; CARDOZO, LUCAS ESTEVES; DE SOUZA, GARCIA FERREIRA; DE SOUZA, NAYANE; ALVES-FERNANDES, DEBORA KRISTINA; FAIAO-FLORES, FERNANDA; PABLO QUINCOCES, JOSE AGUSTIN; DE MORAES BARROS, SILVIA BERLANGA; NAKAYA, HELDER I.; et al. Toxicogenomic and bioinformatics platforms to identify key molecular mechanisms of a curcumin-analogue DM-1 toxicity in melanoma cells. PHARMACOLOGICAL RESEARCH, v. 125, n. B, p. 178-187, NOV 2017. (14/24400-0)

MASSARO, R. R.; FAIAO-FLORES, F.; REBECCA, V. W.; SANDRI, S.; ALVES-FERNANDES, D. K.; PENNACCHI, P. C.; SMALLEY, K. S. M.; MARIA-ENGLER, S. S.. Inhibition of proliferation and invasion in 2D and 3D models by 2-methoxyestradiol in human melanoma cells. PHARMACOLOGICAL RESEARCH, v. 119, p. 242-250, MAR 2017. (10/50300-2, 13/05172-4, 15/10821-7, 14/24400-0, 12/05732-7)

SANDRI, SILVANA; FAIAO-FLORES, FERNANDA; TIAGO, MANOELA; PENNACCHI, PAULA COMUNE; MASSARO, RENATO RAMOS; ALVES-FERNANDES, DEBORA KRISTINA; BERARDINELLI, GUSTAVO NORIZ; EVANGELISTA, ADRIANE FEIJO; VAZQUEZ, VINICIUS DE LIMA; REIS, RUI MANUEL; et al. Vemurafenib resistance increases melanoma invasiveness and modulates the tumor microenvironment by MMP-2 upregulation. PHARMACOLOGICAL RESEARCH, v. 111, p. 523-533, SEP 2016. (14/24400-0, 13/05172-4)

FAIAO-FLORES, F.; ALVES-FERNANDES, D. K.; PENNACCHI, P. C.; SANDRI, S.; VICENTE, A. L. S. A.; SCAPULATEMPO-NETO, C.; VAZQUEZ, V. L.; REIS, R. M.; CHAUHAN, J.; GODING, C. R.; et al. Targeting the hedgehog transcription factors GLI1 and GLI2 restores sensitivity to vemurafenib-resistant human melanoma cells. Oncogene, v. 36, n. 13, p. 1849-1861, MAR 30 2017. (12/04194-1, 15/10821-7, 13/05172-4, 14/24400-0)

DE OLIVEIRA, ERICA APARECIDA; DE LIMA, DIOGENES SAULO; CARDOZO, LUCAS ESTEVES; DE SOUZA, GARCIA FERREIRA; DE SOUZA, NAYANE; ALVES-FERNANDES, DEBORA KRISTINA; FAIAO-FLORES, FERNANDA; PABLO QUINCOCES, JOSE AGUSTIN; DE MORAES BARROS, SILVIA BERLANGA; NAKAYA, HELDER I.; et al. Toxicogenomic and bioinformatics platforms to identify key molecular mechanisms of a curcumin-analogue DM-1 toxicity in melanoma cells. PHARMACOLOGICAL RESEARCH, v. 125, p. 10-pg., 2017-11-01. (14/24400-0)

ALVES-FERNANDES, DEBORA KRISTINA; DE OLIVEIR, ERICA APARECIDA; FAIAO-FLORES, FERNANDA; ALICEA-REBECCA, GRETCHEN; WEERARATNA, ASHANI T.; SMALLEY, KEIRAN S. M.; DE MORAES BARROS, SILVIA BERLANGA; MARIA-ENGLER, SILVYA STUCHI. ER stress promotes antitumor effects in BRAFi/MEKi resistant human melanoma induced by natural compound 4-nerolidylcathecol (4-NC). PHARMACOLOGICAL RESEARCH, v. 141, p. 63-72, MAR 2019. (17/07010-2, 17/04926-6, 14/06959-0, 14/24400-0)

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