Modulação da expressão de VEGF-C por mediador relacionado ao estresse em cultura de carcinoma espinocelular de boca

Resumo

Nos últimos anos tem sido demonstrado que os mediadores do estresse, epinefrina e norepinefrina, modulam diversos processos celulares como a proliferação, a migração celular e a apoptose durante a tumorigênese, influenciando assim o crescimento e a progressão tumoral. A presença de receptores beta-adrenérgicos (²-AR) e sua expressiva resposta ao estímulo da norepinefrina foram identificadas em várias linhagens de células tumorais, incluindo o carcinoma espinocelular de boca. Pretende-se neste estudo investigar a influência da norepinefrina na expressão do fator de crescimento endotelial vascular do tipo C (VEGF-C) em cultura de células de carcinoma espinocelular de boca que contenham beta-receptores, visando conhecer o papel desta catecolamina na via de sinalização para produção deste fator linfangiogênico. Para atingir este objetivo serão utilizadas linhagens SCC9 e SCC25 de carcinomas espinocelulares de língua. As células serão mantidas e expandidas em meio de cultura composto por partes iguais de Eagle modificado por Dulbecco´s e meio de cultura F12. Posteriormente, a cultura de células neoplásicas será estimulada com o neurohormônio norepinefrina em diferentes concentrações e com propanolol, um antagonista inespecífico dos receptores adrenérgicos. O nível da proteína VEGF-C no sobrenadante da cultura de células neoplásicas SCC9 e SCC25 após tratamento com norepinefrina será determinado por ELISA. A técnica de RT-PCR em tempo real será utilizada para avaliar a expressão do VEGF-C nas culturas SCC9 e SCC25 tratadas com norepinefrina. O RNA será extraído das culturas com TRIzol. A quantidade e qualidade do RNA serão verificadas por espectofotometria e o cDNA será sintetizado com superscript II reverse. Níveis de RNAm para os genes estudados serão mensurados pelo sistema Sybr Green no aparelho de PCR em tempo real. Serão usados primers específicos para o VEGF-C. Os dados dos ensaios da cultura de células serão submetidos a análise estatística e os dados da análise quantitativa do RT- PCR em tempo real serão apresentadas em quantas vezes a expressão do gene alvo aumentou ou diminuiu em relação ao controle. (AU)