Contribuição do estresse oxidativo e enzimas NADPH oxidases (NOXes) para as lesões vasculares e renais associadas ao diabetes

Resumo

O diabetes mellitus representa uma das mais importantes doenças crônicas não transmissíveis. A prevalência do diabetes mellitus tipo 2 aumenta rapidamente não somente nos países da América Latina, mas em todo mundo, com índices crescentes mais significativos na população jovem. O estresse oxidativo gerado pela hiperglicemia tem papel importante no aumento do risco das complicações do diabetes, as quais incluem lesões vasculares e renais. Como a enzima NADPH oxidade (NOX) representa elemento central nas disfunções vasculares e renais associadas ao diabetes, a presente proposta pretende determinar o papel de isoformas específicas de NOX (NOX1 e NOX4), bem como das subunidades p47phox e NOXO1, no desenvolvimento das complicações vasculares e renais do diabetes. Avaliaremos o potencial das NOX1/NOX4 na geração de espécies reativas de oxigênio (ROS) e seu papel nas lesões vasculares e renais associadas ao diabetes. Nossa hipótese é que isoformas específicas de NOX estão diferencialmente e positivamente reguladas nos tecidos vascular (NOX1) e renal (NOX4) de animais diabéticos, contribuindo assim para as disfunções associadas a esta patologia. Os efeitos seletivos das NOXes nos tecidos vascular e renal estão relacionados à expressão diferencial das subunidades p47phox e sua isoforma NOXO1. Se nossa hipótese estiver correta estas isoformas de NOX representarão alvos ideais para geração de drogas que visam a redução das complicações do diabetes. Nosso objetivo, portanto, é determinar o papel das ROS geradas pelas NOX1 e NOX4 na vasculopatia e nefropatia associadas ao diabetes e avaliar se estes são decorrentes da expressão diferencial das subunidades p47phox e NOXOl. Para tanto, usaremos três enfoques experimentais: 1) camundongos db/db (C57BLKS/JLepr), considerado modelo de nefropatia diabética, serão cruzados com camundongos knockout para NOX1 (NOX1-/-) e NOX 4 (NOX4-/-) e as alterações vasculares e renais serão caracterizadas. Esta parte será desenvolvida pelo grupo da Dra. Rhian Touyz. 2) camundongos db/db (C57BLKS/JLepr) serão tratados com inibidores específicos de NOX, associados ou não a antagonista de receptores ATI (ATIR) de angiotensina II (Ang II) e os efeitos sobre as lesões vasculares e renais serão determinados. Esta parte será desenvolvida pelo nosso grupo na FMRP-USP. 3) artérias, glomerulus e túbulos renais serão isolados de camundongos diabéticos e controle. Culturas de células vasculares (muscular lisa e endotelial) e renais (tubulares proximais, mesangiais e podócitos) destes animais serão utilizadas para determinar as vias moleculares que participam da geração de ROS mediada pelas NOXes 1 e 4. Os estudos moleculares vasculares e renais serão realizados pelo nosso grupo e pelo grupo da Dra. Rhian Touyz, respectivamente. (AU)