Avaliação do perfil de micro-RNAs e da expressão de genes relacionados ao estresse oxidativo e a resposta inflamatória em micropartículas de pacientes sépticos

Resumo

A patogênese da sepse caracteriza-se pela resposta inflamatória exacerbada e produção aumentada de espécies reativas de oxigênio (EROS). EROS podem ser liberadas por microparticulas produzidas após a ativação de diversos tipos celulares. Nossos estudos prévios já demonstraram a presença de um subtipo de micropartículas (exossomos) na circulação de pacientes com choque séptico, os quais induzem apoptose de células vasculares em cultura e disfunção miocárdica ex vivo. Estudos prévios demonstraram que essas partículas contem RNA mensageiro (RNAm) e micro-RNA (miRNA), podendo assim eventualmente atuarem como transmissores de sinalização celular à distância. No entanto, a importância deste mecanismo durante a sepse não foi avaliada. Este estudo visa analisar o padrão de expressão de miRNA global e a presença de genes relacionados ao estresse oxidativo e resposta inflamatória em micropartículas isoladas de pacientes com sepse. Nosso objetivo é comparar estes resultados com os obtidos em voluntários normais e correlacionar os achados com disfunção orgânica e mortalidade. Sangue (20 ml) será coletado de 40 pacientes com choque séptico nas primeiras 48 horas e, para os sobreviventes, após sete dias de diagnóstico. Vinte voluntários sadios servirão como controle. Após o isolamento das microparticulas, seu conteúdo de miRNA e mRNA será avaliado por reação em cadeia de tempo real da polimerase (qPCR). Para a avaliação da expressão dos miRNAs por qPCR, o kit TagMan MicroRNA Array será usado. A avaliação da resposta inflamatória será realizada com o kit Human Immune Array (Applied Biosystems) e o estresse oxidativo nos exossomos será avaliado através do kit Human Oxidative Stress and Antioxidant Defense Array (SABiosciences). (AU)