Investigação de RNAs não codificadores envolvidos em controle de expressão gênica em Leishmania

Resumo

O parasito Leishmania, agente etiológico da leishmaniose, como outros tripanosomatideos, possui controle da expressão gênica a nível pós-transcricional. Uma classe diversa de RNAs não codificadores foram identificados como fatores regulatórios no controle pós transcricional da expressão gênica em diversos organismos, incluindo em tripanosomatídeos. Uma investigação de genes candidatos a ncRNA em L.major levou à descoberta do transcrito ODD3. Transfectantes com expressão ectópica de ODD3 têm alterações fenotípicas claras. ODD3 se localiza na região 3'UTR do gene da proteína ribossômica S16 e sua existência como transcrito independente também foi confirmada. Interessante ressaltar que dois genes, LmjF26.0880 e LmjF26.0890, transcrevem a proteína S16 mas somente no gene LmjF26.0890 encontramos o ODD3. Investigaremos o significado da presença do ncRNA ODD3 como parte do transcrito de uma das cópias do gene LmjF26.0890. Investigaremos o fenótipo de superexpressores de LmjF26.0890 e LmjF26.0880 e produziremos mutantes que tenham a sequência ODD3 nocauteada do genoma. Os mutantes gerados serão utilizados para avaliar o perfil de expressão e a localização subcelular da proteína S16, com auxílio de etiquetas distintas fusionadas com cada uma das CDSs. Complementaremos o estudo com a investigação da presença de transcritos curtos emergentes dos transcritos dos genes de proteínas ribossômicas que apresentam organização genômica similar à de S16. Em adição, investigaremos outros potenciais genes alvo do controle por ODD3.