Estrutura e dinâmica do trocador Na+/Ca2+ de Drosophila melanogaster

Resumo

Trocadores de Na+/Ca2+ (NCX) utilizam o gradiente eletroquímico do Na+ para promover o transporte de Ca2+ para fora da célula. Além de transportar Na+ e Ca2+, os NCX também são regulados por estes íons. Assim, a ligação de Ca2+ aos domínios citoplasmáticos CBD1 (calcium-binding domain 1) e CBD2 (calcium-binding domain 2) ativa o transporte através da membrana. O trocador de Drosophila melanogaster, CALX, possui comportamento anômalo pois é inibido pela ligação de Ca2+ em CBD1; no CALX, o domínio CBD2 não liga Ca2+. O objetivo desta proposta de pesquisa é investigar do ponto de vista estrutural o mecanismo pelo qual a ligação de Ca2+ em CBD1 inibe a atividade do CALX. Para isto, pretende-se utilizar Ressonância Magnética Nuclear (RMN) em solução para estudar a estrutura e a dinâmica de construções contendo os dois domínios, CBD1 e CBD2, na ausência e presença de Ca2+. Até este momento não há informações estruturais detalhadas ou de dinâmica sobre os domínios transmembranares de um trocador de Na+/Ca2+ eucariótico. Pretende-se desenvolver um protocolo para expressão e purificação de construções que correspondem aos dois domínios transmembranares do CALX e às regiões XIP e r-loop. Espera-se obter amostras enriquecidas com 15N e adquirir espectros de correlação 1H-15N para avaliar a adequação das construções para estudos de RMN em solução. (AU)