Avaliação funcional do gene NF-Kb1 na tumorigênese de linhagens celulares de carcinoma renal

Resumo

O carcinoma de células renais (CCR) representa aproximadamente 2 a 3% dos tumores malignos humanos e dentre os tumores urológicos, é o mais agressivo. A heterogeneidade biológica, a resistência a drogas e os efeitos colaterais aos quimioterápicos são os maiores obstáculos para o tratamento efetivo do CCR. Várias moléculas têm sido apontadas como responsáveis pelo fenótipo agressivo desse tumor, uma delas é o fator de transcrição NF-:². NF-:² é o nome coletivo para os fatores de transcrição da família Rel. Em mamíferos são conhecidos cinco membros desta família: RelA (p65), RelB, c-Rel, NF-:²1 (p105/p50) e o NF-:²2 (p100/p52). O papel funcional do NF-:²1 no CCR vem sendo investigado nos últimos anos porém, está longe de ser elucidado. O gene nfkb1 codifica a proteína p105 que sofre clivagem e remoção da porção carboxi-terminal no proteassoma 26S, gerando a p50, proteína sem atividade transcricional porém, com capacidade de ligação ao DNA. Por esta razão, os homodímeros de p50 não considerados inibidores de transcrição. Entretanto, esses dímeros podem recrutar um co-ativador, a Bcl-3, e desta forma promover a ativação a transcrição de genes. Na última década vários trabalhos demonstraram a ativação do NF-k² no CCR e muitos apontaram a p50 como uma molécula importante na progressão e metástase tumoral. Em trabalho recente nosso grupo avaliou a ativação do NF-:² no carcinoma renal metastático com e sem tratamento antiangiogênico com endostatina (ES). Os resultados mostraram que as células tumorais obtidas dos pulmões metastáticos apresentavam ativação do NF-:² e que a terapia gênica com ES causou a redução da atividade de ligação do NF-:². O gel supershift mostrou que o único membro da família NF-:² ligado ao DNA das células tumorais metastáticas era a p50. A análise imunohistoquímica dos pulmões metastáticos confirmou a presença nuclear dessa molécula. Além disso, comprovou-se a presença do complexo p50/Bcl-3 no núcleo dessas células, indicando um papel importante dos dímeros de p50 na regulação da transcrição de genes no CCR metastático. Neste estudo avaliaremos o efeito do silenciamento do gene nf-kb1, através da técnica de RNA de interferência, em linhagens celulares de RCC. Com isso, verificaremos o potencial desse gene como alvo terapêutico para o CCR. (AU)