Análise funcional da proteína não estrutural do segmento M (NSm) do Orthobunyavirus Oropouche

Resumo

O vírus Oropouche (OROV) pertence à família Bunyaviridae, gênero Orthobunyavirus, sorogrupo Simbu, e é a segunda causa mais frequente de arboviroses no Brasil, somente suplantada por dengue. OROV é transmitido pela picada do vetor Culicoides paraensis e em seres humanos causa geralmente doença febril aguda, com significante impacto em saúde pública, especialmente na Amazônia. OROV tem genoma composto por três segmentos de RNA (L, M e S), que codificam proteínas estruturais, a polimerase, e duas proteínas não estruturais - NSm e NSs. A proteína NSs é fator de virulência reconhecido em alguns vírus do gênero Orthobunyavirus, mas quase nada se sabe sobre funções da proteína NSm. Evidências obtidas com outros vírus da família mostram que NSm tem papel em processos de montagem e morfogênese de partículas virais, e também atua de forma sinérgica à proteína NSs no controle da resposta de interferon. Todavia, não existem conhecimentos sobre funções da NSm de OROV. O presente projeto visa a investigar papéis da NSm de OROV na relação vírus-célula em níveis de célula e de organismo, utilizando modelos in vitro e in vivo. Pretendemos determinar a localização celular de NSm durante a replicação de OROV; caracterizar in vitro e in vivo os efeitos de um OROV knockout de NSm (rOROV”NSm); analisar o efeito da expressão heteróloga de NSm, bem como da coexpressão heteróloga de NSm e NSs em células de mamífero e artrópode; construir OROV e rOROV”NSm com proteína fluorescente para estudar disseminação e patogênese em animal experimental por microscopia intravital. Este projeto de doutorado faz parte do projeto temático 2014/02438-6, sob coordenação do Prof. Dr. Luiz Tadeu Moraes Figueiredo.