Investigação de RNAs não codificadores em Leishmania (Viannia) braziliensis

Resumo

As leishmanioses, problema grave de saúde pública, são causadas por protozoários do gênero Leishmania. A plasticidade genética do protozoário e a consequente diferença no padrão de expressão gênica do parasito podem explicar o espectro da patogenicidade observado entre espécies ou linhagens de uma mesma espécie. A análise comparativa dos genomas de Leishmania (Viannia) braziliensis, Leishmania (Leishmania) infantum e Leishmania (L.) major revelou alta conservação sintênica e de sequências codificadoras de proteínas e demonstrou alta divergência das sequências não codificantes. Neste contexto torna-se interessante estudar elementos e mecanismos envolvidos na regulação da expressão gênica, que ocorre no nível pós-transcricional nesses parasitos. Os possíveis papéis de RNAs não codificadores (ncRNAs) nessa regulação, pouco explorados em Leishmania, e a possibilidade da descoberta de mecanismos 'novos' de controle de expressão gênica tornam atrativo seu estudo. Sendo assim, as principais metas desta proposta de pesquisa são caracterizar novos ncRNAs, possivelmente envolvidos na regulação da expressão gênica de L. braziliensis durante o desenvolvimento do parasito. Para isso, depois de identificar o conjunto de transcritos não polissômicos, pela construção e sequenciamento de bibliotecas de RNA dos três principais estágios de vida, empregaremos a genética reversa para investigar o papel e os alvos de ação dos potenciais ncRNAs regulatórios. Um conjunto de ncRNAs identificados será caracterizado funcionalmente pela interferência/diminuição (knockdown) de seus níveis, por RNAi ou por nocaute, e seus alvos e "parceiros" serão investigados por métodos de detecção de RNA e. Com esse trabalho pretendemos contribuir para a compreensão da maquinaria envolvida na regulação da expressão gênica em L. braziliensis.