Identificação e validação das interações miRNA-mRNA durante a fase de desenvolvimento pré-imaginal de Apis mellifera

Resumo

O desenvolvimento de um organismo é coordenado por complexas redes de interações gênicas, estas construídas em resposta a diferentes classes de moléculas reguladoras. Nos insetos, o desenvolvimento é regido pelo hormônio juvenil (HJ) e os ecdisteróides (20E). Estes são os principais hormônios morfogenéticos diretamente relacionados às mudas nas fases larvais e à metamorfose. Durante a fase larval, o HJ se mantém em altos títulos e tem ação juvenilizante. Quando a larva atinge a idade e tamanho específicos, os títulos deste hormônio caem mediante ao aumento significativo dos níveis dos ecdisteróides, que em cada muda larval apresentou títulos periódicos. No entanto, pouco se sabe a respeito da ação destes hormônios sobre essas cascatas gênicas em momentos específicos do desenvolvimento, metamorfose e emergência do adulto. Neste trabalho, pretendemos investigar a relação entre os genes candidatos: ultraspiracle (Usp), fushi tarazu transcription factor 1 (ftz-f1), ecdysone receptor (EcR), calponin (chd64), insulin- receptor 2 (inr2) Krüppel homolog 1 (Kr-h1), germ-cell expressed (gce), early trypsin (et), e os seus miRNAs reguladores, miR-34, miR-281, miR-252a e miR252b, usando protocolos de última geração, tais como análises in silico para anotação gênicas e predições de alvos e ulterior construção das redes de interação; além disto serão usados ensaios com genes repórteres para validação das predições e da expressão diferencial de genes. Em particular, focalizaremos a fase pré-imaginal de fêmeas da espécie Apis mellifera, adicionando dois novos componentes (GCE e ET) à complexa rede de interações proposta pelo nosso laboratório, no desenvolvimento das abelhas. (AU)