Avaliação de protocolo para extração de polissacarídeos intracelulares de bactéria cariogênica

Resumo

Considerando que os polissacarídeos intracelulares bacterianos (PICs) podem ser um fator importante para o desenvolvimento da cárie dental e que há limitações metodológicas para sua obtenção, o objetivo do presente estudo é avaliar o efeito de diferentes protocolos de extração destes polímeros de biofilmes de Streptococcus mutans. Assim, biofilmes de S. mutans UA 159 serão formados por 5 dias em lamínulas de vidro em meio de baixa massa molecular contendo sacarose 1%, com o objetivo de simular as condições fisiológicas de formação do biofilme dental na cavidade bucal. Após o quinto dia de crescimento, os biofilmes serão coletados e os polissacarídeos da matriz serão extraídos. A seguir, o material contendo as bactérias hígidas será submetido à extração dos PICs. Esta extração preconiza a lise da parede celular bacteriana na presença de temperatura e base forte. Assim, as amostras serão submetidas a um dos seguintes protocolos de extração: 1) NaOH 1 M à 100 ºC durante 5 min; 2) NaOH 1 M à 100 ºC durante 10 min; 3) NaOH 1 M à 100 ºC durante 15 min 4) NaOH 0,5 M à 100 ºC por 5 minutos; 5) NaOH 0,5 M à 100 ºC por 10 min ou 6) NaOH 0,5 M à 100 ºC por 15 min. Após precipitação com etanol, os polissacarídeos serão quantificados por espectrofotometria e analisados quanto à sua composição monossacarídica. Para comparação entre os grupos, inicialmente será analisada a normalidade dos resíduos e homogeneidade das variâncias. Sendo normal a distribuição dos valores, será usada ANOVA seguido de teste post-hoc de Tukey para comparação entre grupos. Caso a distribuição não seja normal, será feita a comparação usando o teste de Kruskal-Wallis. O nível de significância aceito será de 5%.