Avaliação funcional do gene NANOG na segregação de linhagens celulares em embriões bovinos

Resumo

O segundo evento de diferenciação celular em mamíferos consiste na separação entre o epiblasto (EPI) e o hipoblasto ou endoderma primitivo(PE). Isto ocorre logo após a segregação da massa celular interna (MCI) e o trofectoderma (TE). Sabe-se em camundongos que NANOG atua opostamente à GATA6 e a via de sinalização por FGF na segregação entre EPI/PE. Análises de expressão gênica agrupam populações celulares de forma que a expressão de NANOG e GATA6 são excludentes. O presente projeto visa testar a hipótese que NANOG é necessário para a especificação de EPI em embriões bovinos. Pretende-se realizar deleção gênica de NANOG mediada por CRISPR/Cas9 em zigotos produzidos in vitro. Os embriões serão então cultivados para avaliação da taxa de formação de blastocistos, distribuição celular, expressão gênica e proteica. Espera-se inibir a formação do EPI e promover uma MCI contendo apenas células de PE. Desta maneira este projeto contribuiria com o entendimento dos mecanismos de segregação da EPI/PE na espécie bovina. (AU)