Desenvolvimento de uma ferramenta para expressão de GFP em células vivas do eucarionte Arcella intermedia, para determinar o envolvimento de Rab-GTPases no processo de formação de carapaça

Resumo

Arcellinida (Amoebozoa) é um grupo monofilético de tecamebas caracterizado pela presença de uma carapaça (teca). Como essa linhagem adquiriu a capacidade de construir uma estrutura externa rígida ainda é desconhecido. Para elucidar a origem evolutiva da carapaça dos Arcellinida, é necessário entender seu processo de formação, o que já foi bem descrito para o gênero Arcella com base em dados citomorfológicos. Atualmente, desconhecemos o aparato molecular envolvido na formação de carapaça. Com base nas descrições citomorfológicas e resultados recentes do projeto principal de doutorado do candidato, as subfamílias Rab8 e Rab11 da família de genes Rab GTPase tornaram-se candidatas-chave a estarem envolvidas no processo de formação de carapaça. Aqui, propomos estabelecer e aplicar um protocolo de expressão funcional de Rab-GFP (Green Fluorescent Protein) em Arcella intermedia, com o objetivo de documentar a participação das subfamílias Rab8 e Rab11 no processo de formação de carapaça. Além disso, pretendemos realizar a expressão funcional de Rab-GFP em outros Amoebozoa. Em última análise, o projeto de doutorado principal do candidato e a presente proposta nos permitem lançar luz sobre a origem evolutiva da carapaça dos Arcellinida, enquanto estabelece um framework baseado em transcriptômica de célula-única, filogenética, imunocitoquímica e GFP, adequado para ser aplicado a outros Amoebozoa e micro-eucariontes. (AU)