Avaliação do papel da relaxina sobre passos iniciais e tardios da espermatogênese, em modelo de co-cultura de células germinativas e de Sertoli

Resumo

Relaxina pertence à família de hormônios peptídicos semelhantes à insulina e interage com um receptor acoplado a proteína G, denominado RXFP1. Em machos, a deleção do gene que codifica relaxina resulta em infertilidade, e estudos anteriores de nosso laboratório revelaram que relaxina e RXFP1 estão co-localizados em células de Sertoli, RXFP1 está presente em células da linhagem germinativa e relaxina promove a proliferação das células de Sertoli, por um mecanismo que parece envolver ativação de ERK1/2. Esses dados sugerem que relaxina pode desempenhar um papel autócrino e/ou parácrino para regular a espermatogênese. O objetivo da presente etapa é aprofundar esses estudos, avaliando o papel do hormônio em estágios iniciais e tardios da espermatogênese. Para isso, utilizaremos um modelo de co-cultura de células de Sertoli e germinativas provenientes de ratos em diferentes fases do desenvolvimento, onde serão avaliados: a) efeito da relaxina sobre a proliferação e diferenciação de gonócitos e espermatogônias, diferenciação de espermátides redondas a espermatozóides, utilizando marcadores específicos de proliferação e diferenciação, em técnicas de citometria de fluxo, PCR em tempo real, Western blot e imunofluorescência; b) efeito do silenciamento de receptores de relaxina sobre esses parâmetros; b) efeito de relaxina sobre o fator de transcrição CREMt, importante para a diferenciação de espermátides redondas, por ensaios de imunoprecipitação de cromatina; c) efeito da relaxina sobre a produção, pelas células de Sertoli, de fatores importantes para a espermatogênese, como c-kit, GDNF e caderinas, por RT-PCR em tempo real, Western blot e immunofluorescência. (AU)