Criopreservação do sêmen ovino com incorporação de colesterol por ciclodextrina

Resumo

A preocupação com a qualidade do sêmen ovino congelado tem sido motivo de muitas pesquisas, principalmente pela dificuldade de transposição cervical durante a inseminação artificial. Contudo, a inseminação intra-cervical é frequentemente usada em ovinos e resulta em redução da fertilidade com o uso do sêmen congelado. Nesse experimento foi testada a hipótese de que o influxo de colesterol incorporado por ciclodextrina melhora os parâmetros espermáticos. Foram coletados cinco ejaculados de seis carneiros White Dorper (n=30), sendo cada ejaculado dividido em três tratamentos: controle, somente diluidor (CON); diluidor acrescido de ciclodextrina agregada ao colesterol (CLC+CHO); e diluidor acrescido de ciclodextrina pura (CLCP). As amostras foram previamente analisadas quanto aos parâmetros de motilidade (avaliação subjetiva e computadorizada), integridade de membranas plasmáticas e acrossomal, potencial de membrana mitocondrial, morfologia espermática e produção de radicais livres por microscopia. Em seguida as amostras foram envasadas em palhetas na concentração de 50x106 espermatozoides/ml, identificadas e criopreservadas por sistema automatizado. Após, o sêmen foi descongelado (37oC por 30 segundos) e analisado novamente para os parâmetros de motilidade, potencial de membrana mitocondrial, morfologia espermática e produção de radicais livres por microscopia, além disso, foram acrescentadas as análises por citometria de fluxo da integridade de membrana plasmática e acrossomal, peroxidação lipídica e permeabilidade de membrana plasmática, e por fluorimetria da quantificação de colesterol e ésteres de colesterol. Os dados foram avaliados quanto à normalidade dos resíduos (teste de Shapiro-Wilk) e homogeneidade das variâncias. Quando p < 0,05, os dados foram transformados e reavaliados. Comparações entre os grupos foram analisadas pelo procedimento misto (PROC MIXED) do SAS. Quando o efeito de grupo foi significativo, as diferenças entre grupos foram localizadas através do Teste de Tukey. Dados que, mesmo após transformação, continuaram sendo significativos nos testes de normalidade e/ou homogeneidade, foram analisados por estatística não-paramétrica de ordem (Teste de Kruskal-Wallis). O tratamento CLC+CHO se mostrou mais eficaz em preservar os parâmetros de motilidade, integridade de membranas e potencial mitocondrial quando comparado aos outros tratamentos. O grupo CLCP mostrou queda nos parâmetros de motilidade, integridade de membrana, potencial mitocondrial, mostrando, com isso, uma queda na preservação espermática. Pode-se concluir com esse estudo que o tratamento com ciclodextrina acrescida de colesterol contribui para melhor preservar os parâmetros espermáticos do sêmen ovino.