Análise transcriptômica por RNAseq dos genes alvos modulados por cScratch2 no desenvolvimento neural

Resumo

A diferenciação dos componentes neurais é um processo que envolve a deflagração de várias etapas concatenadas. Tanto o egresso do ciclo celular quanto a aquisição de características de diferenciação envolvem a ativação e repressão de perfis de expressão gênica por fatores de transcrição distintos. Recentemente, nosso laboratório clonou e caracterizou a expressão do fator de transcrição cScratch2 (cScrt2) durante o desenvolvimento inicial da medula espinhal no embrião de galinha. Esse fator pertence à superfamília Snail de fatores de transcrição do tipo zinc-finger, conhecidamente importantes em diversas etapas do desenvolvimento embrionário animal. cScrt2 é especificamente expresso em estágios iniciais do desenvolvimento no sistema nervoso central e periférico. No tubo neural truncal, essa expressão parece ser restrita a células que deixaram o ciclo celular mas ainda não se diferenciaram, sugerindo uma possível função desse fator na ativação do programa neural.Nesse projeto nos propomos determinar os genes-alvo de cScrt2 durante a diferenciação neural comparando o transcriptoma da medula espinhal em desenvolvimento e após perda de função de cScrt2. Para isto, coletaremos tubos neurais eletroporados com a forma dominante-negativa de cScrt2 (cScrt2DN) e sequenciaremos por RNAseq as amostras eletroporadas e controle. A validação será priorizada para sequências de fatores transcricionais. (AU)