Inseminação artificial de cadelas com sêmen sexado por gradiente de densidade

Resumo

Diferentes técnicas são descritas para sexagem do sêmen em bovinos. O método de centrifugação em gradiente descontínuo Percoll é descrito como eficaz em algumas espécies, apesar de apresentar acuidade discutível na maioria dos casos. No entanto, tal método apresenta diferença significativa em relação aos custos, quando se compara à citometria de fluxo. Nos cães, nenhum estudo sobre a sexagem de espermatozoides foi encontrado na literatura, apesar da procura pelos criadores em relação a determinado sexo que favoreça a venda de animais e do alto crescimento da indústria pet. Por esta razão, o presente trabalho visa o desenvolvimento de uma técnica compatível com a realidade de criadores de cães, com custo acessível e sem a necessidade de equipamentos sofisticados. O estudo será dividido em 2 etapas, sendo o Experimento I avaliará entre 3 protocolos de centrifugação em gradiente de densidade (Percoll, Percoll associado ao Nycoprep e Ficoll). As células espermáticas serão avaliadas pré e pós-centrifugação quanto a motilidade pelo CASA (Computer-Aided Semen Analyzer), concentração do ejaculado, morfologia espermática e integridade das membranas plasmática, acrossomal e função mitocondrial. As amostras pré e pós-centrifugação avaliadas por RTqPCR para identificar o método que possa separar maior número de espermatozoides contendo o cromossomo X. Após a determinação do método mais adequado, o Experimento II testará a fertilidade in vivo das células espermáticas separadas pelo método que separou maior quantidade de espermatozoides X, utilizando-se a inseminação artificial. Espera-se obter maior número de fêmeas e tamanho da ninhada compatível com a raça quando os resultados forem comparados ao controle. (AU)