Mutagênese sítio dirigida de uma nova autotransportadora em uma linhagem de Escherichia coli patogênica para aves (APEC) e avaliação da contribuição deste gene à patogenicidade

Resumo

Atualmente, o Brasil é o maior exportador de carne de frango e o terceiro maior produtor mundial, sendo, por isso, a indústria avícola importante para as economias interna e exportadora. Apesar de ser um importante segmento econômico, a indústria avícola está sujeita a fatores que podem afetar significativamente seus rendimentos e custos. Dentre eles, as infecções causadas por Escherichia coli patogênica para aves (APEC) são responsáveis por altas taxas de morbidade e mortalidade. Linhagens patogênicas para aves estão associadas a infecções extra-intestinais, sendo o termo colibacilose empregado para englobar o grande número de doenças existentes. Além disso, estudos já demonstram que linhagens APEC e linhagens de E. coli patogênicas extra-intestinais de origem humana (ExPEC) compartilham características de patogenicidade, como sorogrupos, grupos filogenéticos e genótipos de virulência incluindo sequências relacionadas a plasmídeos, à adesão bacteriana, sistemas de captação de ferro e toxinas. Inúmeros trabalhos já foram realizados procurando estabelecer os mecanismos de patogenicidade, a identificação de marcadores e a descrição de novas proteínas de virulência em linhagens APEC. No entanto, mais estudos são necessários para compreender e identificar os mecanismos de patogenicidade e os fatores de virulência relacionados a esse patótipo. Atualmente, a disponibilidade de sequências genômicas possibilita a análise comparativa entre diferentes linhagens, permitindo acessar a variabilidade relacionada ao conteúdo gênico, à organização genômica e o estudo comparativo dos genomas. A comparação dos genomas das linhagens brasileiras sequenciadas (SEPT362, SCI-07, O08 e S17) já permitiu observar a grande variabilidade que existe quanto à presença/ausência de fatores associados à virulência. Outra importante questão revelada pelo estudo dos genomas foi que, aproximadamente 20% dos genes anotados possuem a função do produto desconhecida e descrita como proteína hipotética. Esses resultados evidenciaram a necessidade de buscar novos genes associados à virulência. Motivados por essa necessidade, nosso grupo de pesquisa já identificou e caracterizou in silico, um gene que codifica para uma proteína autotransportadora, com domínios de adesina, ainda não descrita em APEC. Assim, o objetivo desse projeto é construir uma linhagem APEC mutagenizada, por meio da deleção desta proteína autotransportadora e verificar sua contribuição à patogenicidade, seus efeitos biológicos (capacidades de adesão e invasão de linhagens celulares cultivadas in vitro, produção de biofilme, motilidade, etc) e a sua influência na transcrição gênica global.