Identificação dos processos celulares que estão alterados no knockout de Ric-8B utilizando sequenciamento em larga escala de transcriptomas.

Resumo

Através do olfato, os animais são capazes de identificar a composição química do meio ambiente. A detecção de odorantes é mediada por milhões de neurônios olfatórios localizados na cavidade nasal. Cada neurônio possui um dendrito que termina em um botão dendrítico de onde partem vários cílios; nessas estruturas estão localizados os receptores olfatórios. A ligação de odorantes aos receptores olfatórios leva à ativação de uma proteína G heterotrimérica específica, a Golf. Quando isso ocorre, a subunidade ± de Golf troca GDP por GTP e se dissocia do complexo com G²³ para ativar a adenilil ciclase III. Os níveis de cAMP intracelular então se elevam e promovem a abertura dos canais ativados por nucleotídeos cíclicos, causando o influxo de Na+ e Ca2+ que culmina na geração do potencial de ação neuronal. Em nosso laboratório, foi identificada a interação de G±olf com a proteína RIC-8B, que atuaria como um possível regulador da sinalização olfatória. Em camundongo adulto, Ric-8B é coexpressa com G±olf de maneira específica e restrita aos neurônios olfatórios e ao striatum, no cérebro. Além disso, RIC-8B é capaz de amplificar a sinalização olfatória em sistemas heterólogos. Estudos in vitro fornecem evidências de que RIC-8B é um fator trocador de nucleotídeos de guanina que interage com G±s e G±q. Portanto, para caracterizar a função in vivo de Ric-8B, estabelecemos uma linhagem de camundongo knockout para o gene Ric-8B. Verificamos que o knockout de Ric-8B é inviável, o que indica que esta proteína é essencial durante o desenvolvimento embrionário. A expressão de Ric-8B no embrião é restrita ao sistema nervoso e o knockout apresenta malformações do tubo neural cranial, apontando para uma função de Ric-8B diferente daquela desempenhada no olfato. Dessa forma, esse projeto tem como objetivo compreender qual o papel desempenhado por Ric-8B durante a embriogênese.