Avaliação da biocompatibilidade de scaffolds de nanofibras contendo LL-37 e do potencial de mineralização de células DPSC sensibilizadas por LPS em contato com estes scaffolds.

Resumo

A engenharia tecidual na Endodontia regenerativa está a alguns passos da aplicação de scaffolds intracanal em humanos com intuito de formar um novo tecido pulpar. Entretanto os riscos de contaminação e infecção do sistema de canais radiculares representa um grande desafio para sua transposição clínica. A proposta deste estudo será avaliar in vitro a biocompatibilidade de scaffolds, o crescimento e diferenciação de células tronco da polpa em contanto com esses materiais, com consequente formação de tecido mineralizado, além da neutralização do lipolissacarídeo bacteriano (LPS). Para tanto, neste projeto serão utilizados scaffolds de nanofibras fabricados pela técnica de eletrofiação de polidioxanona, com adição do peptídeo LL-37 (que é um peptídeo liberado por neutrófilos, capaz de neutralizar os tecidos carregados de LPS e induzir condições favoráveis a regeneração do complexo dentino-pulpar). Esses scaffolds, contendo o LL-37, serão colocados sobre culturas de células DPSC sensibilizadas pelo LPS. A biocompatibiidade desses scaffolds será analisada pelo teste de citotoxicidade por ensaio de WST, e pela avaliação da genotoxicidade através do teste cometa. Serão avaliados também o comportamento das células em contato com esses materiais quanto a expressão dos genes DSPP, DMP1, RUNX2 e ALP por PCR em tempo real (qRT-PCR) e a produção das proteínas DSPP e DMP-1 associadas a mineralização, pelo ensaio imunoenzimático ELISA. Além disso, serão realizados testes funcionais de mineralização (Atividade de Fosfatase Alcalina e Alizarin Vermelho) e a quantificação do LPS residual após contato com os scaffolds contendo LL-37. Os resultados serão analisados pelo teste ANOVA, adotando nível de significância de 5%. (AU)