Otimização da técnica de purificação de populações de Linfócitos T CD4+ e b do sangue periférico por seleção magnética negativa com análise da viabilidade celular, recuperação, e pureza por citometria de fluxo

Resumo

O monitoramento terapêutico de drogas imunossupressoras é utilizado para otimizar o efeito imunossupressor minimizando a toxicidade relacionada à exposição a níveis séricos excessivos. Mesmo sendo sistematicamente utilizado na prática clínica, um número significativo de receptores de transplante renal apresenta rejeição aguda do enxerto no primeiro ano de acompanhamento. Para aperfeiçoar o uso de drogas imunossupressoras, novas estratégias de monitoramento terapêutico estão em investigação. O monitoramento das concentrações de drogas no interior dos linfócitos do sangue periférico é considerado uma abordagem promissora porque indica a disponibilidade do fármaco diretamente no tecido alvo da imunossupressão. A separação celular magnética com anticorpos monoclonais constitui metodologia adequada para isolar linfócitos do sangue periférico, permitindo recuperar um número elevado de células em um período de tempo relativamente curto. A eficiência deste procedimento é, entretanto, variável, sendo maior quando as células de interesse estão na fração marcada (selecionadas positivamente), e menor quando estão na fração não marcada (selecionadas negativamente). Este estudo tem por objetivo otimizar a técnica de separação celular magnética por seleção negativa objetivando obtenção de suspensões de linfócitos T CD4+ e B do sangue periférico com pureza de pelo menos 95%, e analisar sistematicamente por citometria de fluxo a viabilidade celular, a recuperação e a pureza de amostras de sangue de indivíduos adultos saudáveis submetidas ao método otimizado.