Expressão periplasmática, purificação e caracterização da bioquímica inorgânica de uma enzima oxidativa do inseto Bombyx mori (bicho-da-seda)

Resumo

As monooxigenases líticas de polissacarídeos (LPMOs) compõem uma classe recentemente descoberta de enzimas que auxiliam as hidrolases de glicosídeos na degradação de polissacarídeos recalcitrantes através de atividade oxidante. Esta classe de metaloenzimas apresenta um grande potencial para aplicações biotecnológicas, principalmente na área de degradação de polissacarídeos estruturais. As LPMOs podem ser empregadas como complementos para incrementar a eficiência enzimática de coquetéis lignocelulolíticos. Os objetivos deste projeto de pesquisa são realizar a expressão heteróloga, purificação e caracterização da bioquímica inorgânica de uma enzima oxidativa do inseto Bombyx mori (bicho-da-seda). A metaloenzima de Bombyx mori (BmLPMOs) será expressa na região periplasmática e purificada até a homogeneidade através de métodos cromatográficos. Estudos de atividade enzimática serão realizados para determinar a especificidade da BmLPMOs na oxidação de diferentes carboidratos como a celulose, quitina e amido. A importância do íon metálico (Cu2+) na estabilidade estrutural e no processo oxidativo, bem como sua interação com a enzima, serão estudas através de técnicas espectroscópicas. Os resultados oriundos deste projeto de pesquisa possibilitarão caracterizar a ação oxidativa e especificidade da BmLPMOs com relação a diferentes polissacarídeos.