Avaliação de peptídeo anti-integrina radiomarcado modificado por quelante convencional como agente teranóstico em glioblastoma. Biotério e Biossegurança Faixa A - Aquisição de materiais permanentes para Biotério de Pesquisas Pré-Clínicas"

Resumo

O glioblastoma (GB) é o tumor cerebral mais agressivo e sem tratamento curativo. A avaliação da resposta à terapêutica e da progressão ou recidiva do tumor por exames de imagem é outro problema, uma vez que resultados falso-positivos e falso-negativos são frequentes durante o seguimento dos pacientes. A integrina, um receptor de membrana de adesão à superfície celular, é superexpressa no GB. Recentemente, um peptídeo com alta afinidade para integrina, GRGDHV, foi marcado com [99mTc] [Tc(CO)3], e foi descrito como um teranóstico promissor no GB. O projeto atual testará o peptídeo anti-integrina GRGDYV marcado com Ga-68, modificado por DOTA, em modelos pré-clínicos, buscando subsídios para o diagnóstico e tratamento do GB. O peptídeo radiomarcado será preparado de acordo com a expertise do pesquisador e avaliado em experimentos in vitro e in vivo. Duas linhagens celulares de GB humanas (U87 e U251) e uma murina (Gl261) serão cultivadas. A avaliação in vitro da viabilidade celular, ligação e internalização será analisada após a exposição das linhagens celulares de GB ao peptídeo GRGDYV marcado com Ga-68 modificado por DOTA. A eficiência de ligação e a avaliação da internalização serão medidas em pellets e sobrenadantes celulares utilizando um contador gama automático. Alíquotas da suspensão celular será usada para avaliar a viabilidade por azul de tripano. A morte celular induzida pelo peptídeo radiomarcado e o ciclo celular serão analisados por citometria de fluxo, e a expressão dos genes de interesse por qPCR será realizada para evidenciar os mecanismos de ação do peptídeo radiomarcado. A migração celular será avaliada pelo método de cicatrização de ferida. Experimentos de toxicidade aguda serão realizados em camundongos Swiss fêmeas tratados com veículo ou o peptídeo radiomarcado. Após a administração, cada animal será avaliado por imagens de micro-PET/SPECT/CT para avaliação da biodistribuição. Serão realizadas medidas de peso corporal, avaliações hematológicas, macroscópicas e microscópicas. A eficácia do peptídeo radiomarcado será verificada em camundongos BALB/c nude em modelo ortotópico singênico de GB. Após o tratamento, os animais serão avaliados em micro-PET/SPECT/CTpara biodistribuição e eutanasiados para análises macroscópicas e microscópicas do tumor. As expressões dos genes de interesse serão analisadas por qPCR em células tumorais tratadas e não tratadas com o peptídeo radiomarcado. Acreditamos que o peptídeo GRGDYV marcado com Ga-68 modificado por DOTA, bem como outros metalofármacos/metalorradiofármacos identificados em projetos conduzidos por nosso grupo de pesquisadores, podem ser usados na avaliação e/ou tratamento de GB e outros tumores. (AU)