Síntese da proteína morfogenética óssea humana-2 (hBMP-2) no espaço periplásmico do E. coli, sua caracterização e testes pre-clínicos

• Processo: 21/12975-2
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2021
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2022
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia - Cirurgia Buco-maxilo-facial
• Pesquisador responsável: Paolo Bartolini
• Beneficiário: Paolo Bartolini
• Instituição Sede: Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares (IPEN). Secretaria de Desenvolvimento Econômico (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: calvarial critical-size defect | hBMP-2 | osteoinductor | Periplasmic Expression | Síntese e caracterização de produtos osseoindutores

Resumo

Resumo. A BMP-2 humana, uma proteína homodimérica que pertence á familia da TGF-², é um conhecido osseoindutor devido a sua capacidade de induzir regeneração óssea e formação óssea ectópica. Sua forma recombinante é uma alternativa ao enxerto autólogo ósseo. Uma variedade de hBMP-2 derivadas de E. coli foram sintetizadas mediante renaturação de corpos de inclusão citoplasmáticos. O presente trabalho relata a síntese, purificação e caracterização da hBMP-2 periplásmica, obtida diretamente em sua forma corretamente enovelada e autêntica, ou seja sem a metionina inicial típica dos produtos citoplasmáticos que pode induzir uma indesejada imunoreatividade. Um vetor de expressão bacteriano foi construido incluindo a sequencia sinalizadora do DsbA e o cDNA da hBMP-2. O fluido periplásmico foi extraido mediante choque osmótico e analizado mediante SDS-PAGE, Western blotting e HPLC em fase reversa (RP-HPLC). A purificação foi realizada mediante cromatografia de afinidade á heparina, seguida por HPLC de exclusão molecular (HPSEC). A HPSEC foi usada para a analise qualitativa e quantitativa do produto final que mostrou >95% de pureza. O clássico bioensaio em vitro baseado na indução de atividade de fosfatase alcalina em células C2C12 e o bioensaio in vivo tratando defeitos de tamanho crítico na calvária de ratos, confirmaram a sua bioatividade, que também confirmou análogos dados da literatura para a hBMP-2. (AU)