Padronização para a tipagem por DNA dos antígenos de histocompatibilidade de classe II através de ensaios de hibridação de oligonucleotídeos marcados com biotina e revelados por reações...

• Processo: 95/09138-5
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 1996
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 1998
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Imunologia - Imunogenética
• Pesquisador responsável: Maria Helena Stangler Kraemer
• Beneficiário: Maria Helena Stangler Kraemer
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Médicas (FCM). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Antígenos de histocompatibilidade classe II Tipagem molecular Sorologia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Antigenos Histocompatibilidade | Eldot | Ensaios De Hibridacao | Hla - Classe Ii | Pcr/Ssop

Resumo

Os antígenos HLA são detectados na superfície das células por antisoros específicos e, extensivos esforços vem sendo feitos para obter tais soros e definir suas especificidades. Particularmente para os alelos HLA-DR, cuja acurada identificação é muito difícil pela similaridade e seqüência dos" resíduos entre os diferentes aminoácidos que compõe a molécula, somente sete especificidades principais conseguem ser bem definidas sorologicamente: DR1, DR2, DR4, DR7, DR9, DRKTe o grupo associado ao DR52: DR3, DR5, DR6, DR8, que são codificados pela cadeia DRB1 uma vez que a cadeia DRß1 possui apenas um domínio extracelular monofórfico. Foi constatado que alguns desses resíduos estão inseridos na parte interna nas regiões da dobra da molécula de classe II da cadeia ß e por esse motivo não se acham diretamente expostas aos anticorpos e também que o epítopo para o reconhecimento pelo anticorpo muitas vezes está constituído da molécula HLA-DR e mais uma porção peptídica proveniente da parte interna da molécula. O desenvolvimento através de ensaios em biologia molecular, e especialmente a introdução dos métodos por reações em cadeia de polimerize (PCR) vem mostrando grande utilidade para a identificação exata da tipagem dos alelos de classe II. A presente pesquisa pretende introduzir o estudo HLA por DNA usando a metodologia de PCR e posterior hibridação de oligonucleotídeos e tipagem por ELDOT. Serão utilizados um total de 60 indivíduos de um painel local com a finalidade de: a) comparar as tipagens sorológicas e por DNA, b) observar se existe ou não correlação entre ambas, c) efetuar uma análise precisa dos soros para os antígenos tipados e d) identificar os alelos não definidos por sorologia. A obtenção dessas informações é importante para o estudo de transplantes e associações com doenças. (AU)