Desenvolvimento de um sistema para integracao estavel de genes heterologos em linhagens atenuadas de salmonella.

• Processo: 96/08095-3
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 1997
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 1999
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Wanderley Dias da Silveira
• Beneficiário: Wanderley Dias da Silveira
• Instituição Sede: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Salmonella Vacinas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Expressap | Phon | Salmonella | Vacinas

Resumo

Linhagens de Salmonela sp atenuadas com relação à virulência, são utilizadas como carregadoras de diferentes determinantes antigênicos para o sistema retículo-endotelial (SRE) sendo capazes, em muitos casos, de induzir efetiva resposta imunológica contra tais antígenos (Cárdenas e Clements, 1992; Curtiss et al., 1994). Estas linhagens são potenciais candidatas para o desenvolvimento de vacinas bivalentes. A estabilidade da expressão do antígeno heterólogo "in vivo" é uma característica importante na construção de linhagens recombinantes de Salmonela (Hone et al., 1988). Uma forma de estabilização é a integração destes genes heterólogos no cromossomo bacteriano. Vários métodos envolvendo recombinação homóloga em diferentes seqüências do cromossomo foram propostos (Hone et al., 1988; Strugnell et al., 1990). Muitos destes, senão todos, envolvem a utilização de passos intermediários de eliminação de plasmídios ou marcas de resistência a antibióticos. Neste projeto, estamos propondo a construção de um sistema de expressão e recombinação para linhagens Acya Acrp Aasd de S. typhimurium usando o gene phoN como alvo e o gene asd, que codifica a enzima Aspartato-ß-semialdeido desidrogenase, para a seleção de bactérias recombinantes. Tal sistema poderá ser utilizado com qualquer linhagem de Salmonela auxotrófica para Asd. O gene phoN codifica uma fosfatasse ácida não específica e sua expressão é controlada a nível transcricional pelo lócus phoP/phoQ. Estes últimos genes codificam proteínas regulatórias essenciais para a sobrevivência de Salmonela no interior dos fago-lisossomos dos macrófagos (Vescovi et al., 1994). A transcrição de phoN é ativada, no interior dos macrófagos, por PhoP mas, diferente de outros genes ativados por PhoP, mutações em phoN não alteram a virulência de Salmonela e a sobrevivência desta no interior de macrófagos (Vescovi et al., 1994). “Mutações em phoN podem ainda ser acompanhadas fenotipicamente, através da incapacidade de mutantes PhoN” em metabolizar o composto 5-bromo-4-cloro-3-indolil-fosfato (X-P), o que facilita o processo de seleção das linhagens recombinantes. (AU)