Perfil de expressao de genes modulados pela forma agregante da amilina em ilhotas pancreaticas de rato.

• Processo: 04/10691-1
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2004
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2007
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Maria Lucia Cardillo Corrêa Giannella
• Beneficiário: Maria Lucia Cardillo Corrêa Giannella
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Ilhotas pancreáticas Análise de sequência com séries de oligonucleotídeos Diabetes mellitus Apoptose Expressão gênica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Amilina | Apoptose | Diabetes | Expressao Genica | Ilhotas De Langerhans | Microarray

Resumo

O depósito de amilina é um achado histopatológico freqüente em - pacientes portadores de diabetes melito tipo 2 (DM 2) e parece estar relacionado à disfunção da célula beta pancreática característica desta doença. Não está claro, entretanto, se o depósito de amilina é causa ou conseqüência da doença. Existem evidências de que apenas as moléculas de amilina que sofrem agregação in vivo, tal como a amilina humana, sejam citotóxicas para as células ß, enquanto as variedades não agregantes, como a amilina de rato, não apresentam efeito deletério. O objetivo deste projeto é investigar se o perfil de expressão gênica de ilhotas de Langerhans de ratos tratadas com a forma agregante da amilina difere do perfil de expressão gênica de ilhotas tratadas com a forma não agregante, para verificar se a agregação da amilina é responsável pela modulação da expressão de genes relacionados à função da ilhota. Ilhotas isoladas de ratos Wistar provenientes do biotério central da FMUSP serão mantidas em cultura e tratadas com duas doses de amilina de rato (forma não agregante) ou com duas doses de amilina humana (forma agregante) por 30 min, 12 h e 24 h a fim de verificar a cinética dos genes modulados pelas duas formas de amilina e os agrupamentos gênicos (clusters) de acordo com a magnitude de expressão ou função. O RNA isolado de cada uma das condições experimentais será convertido em cDNA o qual, após marcação, será hibridizado com um micro-arranjo composto por, aproximadamente, 15.000 cDNAs, adsorvidos em suporte sólido, representativos de diferentes fases ontogenéticas do pâncreas endócrino. A amplitude do estímulo ou da inibição de genes em ilhotas tratadas com a forma agregante da amilina em relação a ilhotas tratadas com a forma não agregante da amilina e a ilhotas não tratadas será avaliada após quantificação dos sinais associados aos cDNAs adsorvidos na lâmina. Alguns dos genes identificados como diferencialmente expressos entre as ilhotas tratadas nas diferentes condições serão analisados por real-time PCR para confirmação da expressão diferencial. (AU)