Imunolocalização de miosina VA fosforilada em células e tecidos e identificação de proteínas associadas

• Processo: 04/11851-2
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2004
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2005
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Morfologia - Citologia e Biologia Celular
• Pesquisador responsável: Roy Edward Larson
• Beneficiário: Roy Edward Larson
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Imuno-histoquímica Fosforilação Microscopia confocal Miosina tipo V
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Fosforilacao | Imunocitoquimica | Microscopia Confocal | Miosina

Resumo

M. Cristina de Silva Pranchevicius, aluna de pós-graduação e bolsista da FAPESP (Proc.00/2379-7 e 02/09966-0), gerou e caracterizou um anticorpo monoclonal, denominado mAb 9E6, que reconhece no domínio cauda da miosina Va o sítio fosforilado em serina (ser1650 em camundongos). Há evidências que o estado de fosforilação deste sítio determina interações da miosina Va com proteínas alvos e, portanto, regula a função da miosina Va na célula. Iniciamos estudos de imunolocalização da miosina Va fosforilada em células em cultura e observamos uma forte marcação: a) em grânulos intercromatínicos no núcleo ("speckles") em vários tipos celulares, b) nos pólos do fuso (centrossomos) em células metafásicas, e c) em extremidades dendríticas dos melanócitos estimulados por hormônio. Frente estes resultados, o objetivo do presente projeto é determinar a dinâmica de fosforilação da miosina Va por mapeamento imunocitoquímico através de microscopia confocal durante o ciclo celular e em células estimuladas, assim como identificar proteínas ligantes de miosina Va fosforilada, por técnicas de imunoprecipitação e "pull-down". Este projeto visa conhecimento básico sobre os mecanismos de translocação ativa e direcionada de organelas, vesículas e complexos macromoleculares em células, tais processos essenciais e básicos para a melhor compreensão da dinâmica celular. (AU)