Genetica reversa aplicada ao fitopatogeno xanthomonas citri:analise de sistemas de transporte ativo do tipo abc por meio de mutagenese e recombinacao sitio-especifica.

• Processo: 04/15077-0
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2005
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2007
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Rita de Cássia Café Ferreira
• Beneficiário: Rita de Cássia Café Ferreira
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Mutagênese Recombinação Proteínas Xanthomonas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Mutagenese | Proteinas | Recombinacao | Sistema De Transporte | Xanthomonas

Resumo

A X. citri é o agente do cancro cítrico. O objetivo principal do presente trabalho será a aplicação do conceito de genética reversa à bactéria X. citri por meio de técnicas de mutagênese e recombinação sítio-específica voltadas para a geração de mutantes afetados em sistemas de transporte ativo dependentes de ATP (ABC). Para isto serão utilizados como alvos operons e genes constituintes de sistemas de transporte de oligopeptídeos (Opp), maltose e maltodextrinas (Mal) e molibdato (Mod). Mutantes do tipo nocaute serão gerados por meio da inserção de cassetes gênicos que codificam resistência a antibióticos e/ou por meio de amplificação mutagênica por PCR com iniciadores sobrepostos (SOE-PCR). Os genes mutados serão inseridos no cromossomo da de X. citri por meio de vetores suicidas com origem de replicação do plasmídeo R6K e/ou por meio da expressão de proteínas do fago lambda (Red). Os resultados a serem obtidos contribuirão para o desenvolvimento de ferramentas para a manipulação genética de X. citri e estudos de genômica funcional nesse importante fitopatógeno. (AU)