Produção de MMP-2 recombinante

• Processo: 07/55721-3
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2007
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2009
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Raquel Fernanda Gerlach
• Beneficiário: Raquel Fernanda Gerlach
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto (FORP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Bolsa(s) vinculada(s): 09/02774-8 - Produção de MMP-2 recombinante, BP.TT
• Assunto(s): Zimografia Gelatinases Proteínas recombinantes Metaloproteinases da matriz Metaloproteinase 2 da matriz Inibidor tecidual de metaloproteinase-1
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Biologia Molecular | Gelatinase A | Mmps | Mmp-2 | Proteina Recombinante | Timp-1

Resumo

As metaloproteases da matriz (matrix metalloproteinases, MMPs) são enzimas proteolíticas que participam de vários processos fisiológicos e patológicos. Entre as 28 enzimas descritas, a MMP-2 e a MMP-9 são classificadas como gelatinases pela afinidade por esse substrato. Essas 2 MMPs têm um domínio com afinidade por gelatina que permite também que elas sejam purificadas em colunas de gelatina. Até o momento, apenas 2 trabalhos na literatura descrevem a expressão e purificação da MMP-2 recombinante humana (rhMMP-2) no sistema de expressão em E. coil, sendo que em nenhum deles a proteína inteira foi expressa. Também ainda não se encontram na literatura trabalhos usando MMP-2 recombinante expressa em bactérias para ensaios de atividade e inibição em solução, o que indica a relativa dificuldade em obter essa MMP em quantidades suficientes e com a conformação adequada após a expressão em bactérias. O objetivo desse projeto é produzir a rhMMP-2 no sistema de expressão em bactérias para utilização dessa protease em ensaios de atividade proteolítica em solução (fluorimetria) e nos ensaios de zimografia reversa. Esse projeto será desenvolvido em colaboração com a Profa. Dra. Enilza Espreafico, da FMRP/USP. Dois alunos de IC, um aluno de Doutorado e um bolsista de treinamento técnico, além da pesquisadora, farão os experimentos descritos. (AU)