Extração de DNA para a análise da amelogenina em amostras fixadas em formalina, incluídas em parafina e arquivadas por 1 e 5 anos no Departamento de Patologia da UNIFESP

• Processo: 08/11233-8
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2009
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2011
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Anatomia Patológica e Patologia Clínica
• Pesquisador responsável: Edna Sadayo Miazato Iwamura
• Beneficiário: Edna Sadayo Miazato Iwamura
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Genética forense Movimentação e armazenagem de materiais Amelogenina Reação em cadeia por polimerase (PCR) Extração de DNA Amplificação do DNA
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: amelogenin | DNA extraction | fixed tissue | paraffin | Pcr | Patologia Forense

Resumo

A investigação biológica avançou nas últimas décadas com o desenvolvimento da biologia molecular e genética. Entre esses avanços destaca-se a reação em cadeia da polimerase (PCR), que possibilita a amplificação de pequenas amostras de DNA, o suficiente para permitir a identificação. Por essa técnica é possível analisar e identificar o DNA obtido de bulbos capilares, ossos, saliva, sangue, gotas de esperma, lâminas histológicas coradas. entre outros. Novas abordagens surgiram com o advento dessa técnica, como a análise retrospectiva de tecidos incluídos em blocos de parafina para investigação de doenças hereditárias, pesquisa de agentes infecciosos e desordens genéticas. A possibilidade de se estudar DNA extraído de tecidos fixados em formalina e incluídos em parafina (FFTIP), permite investigações retrospectivas valiosas. Entretanto, de acordo com alguns autores é difícil obter DNA genômico de boa qualidade, uma vez que o processo de fixação, frequentemente, resulta na fragmentação do DNA além das ligações cruzadas de proteína-proteína e proteína-DNA que se formam. Além disso, o formaldeído dentro do tecido gradualmente se modifica em ácido fórmico, hidrolisando o DNA. A obtenção do DNA em condições ideais para amplificação é um fator limitante desse tipo de amostra, o tipo de fixador utilizado, o tempo de fixação, condições de inclusão e condições de armazenagem podem resultar na degradação do DNA. Neste trabalho pretendemos utilizar amostras de fígado, baço e cérebro normais coletadas durante os procedimentos de necropsia, bem como amostras de fígado e baço e cérebro obtidas com diferentes tempos de armazenagem (arquivadas por 1 e 5 anos), oriundas dos arquivos do Departamento de Patologia da UNIFESP. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

FUNABASHI, KARINA SILVA; BARCELOS, DENISE; VISONA, IRIA; SILVA, MARCELO SOUZA E; SOUSA, MARIA LUIZA ALMEIDA PRADO OLIVEIRA E; DE FRANCO, MARCELLO FABIANO; MIAZATO IWAMURA, EDNA SADAYO. DNA extraction and molecular analysis of non-tumoral liver, spleen, and brain from autopsy samples: The effect of formalin fixation and paraffin embedding. PATHOLOGY RESEARCH AND PRACTICE, v. 208, n. 10, p. 584-591, 2012. (08/11233-8)

IWAMURA, EDNA S. MIAZATO; SOARES-VIEIRA, JOSE ARNALDO; SILVA, MARCELO SOUZA; FUNABASHI, KARINA S.; GODOY, CARLA D.; ROMERO MUNOZ, DANIEL. Analysis of DNA profiles extracted from degraded samples from archival of formalin fixed tissue included in paraffin (FFTIP) and hairs. FORENSIC SCIENCE INTERNATIONAL GENETICS SUPPLEMENT SERIES, v. 2, n. 1, p. 2-pg., 2009-12-01. (08/11233-8)