Avaliação da diversidade bacteriana presente no biofilme subgengival de indivíduos com doença periodontal agressiva localizada

• Processo: 08/09936-0
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2009
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2011
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia - Periodontia
• Pesquisador responsável: Marcelo de Faveri
• Beneficiário: Marcelo de Faveri
• Instituição Sede: Universidade de Guarulhos (UNG). Campus Guarulhos-Centro. Guarulhos , SP, Brasil
• Assunto(s): Doenças periodontais Placa bacteriana Identificação de bactérias Microbiota RNA ribossômico 16S
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: bactérias não-cultivaveis | Doença Periodontal agressiva | gene 16S rRNA | microbiota subgengival | Periodontia

Resumo

Atualmente estima-se que existem na cavidade bucal cerca de 600-700 diferentes espécies/filotipos de bactérias. Algumas destas estão relacionadas com as doenças periodontais enquanto que outras estão relacionadas com saúde periodontal. Entretanto, cerca de 50% destas espécies ainda não foram cultivadas e pouco se sabe sobre o seu papel no processo etiológico da doença periodontal. Desta forma, o objetivo deste estudo será analisar de uma forma mais sistemática o biofilme subgengival de indivíduos com doença periodontal agressiva localizada (PAgL) e determinar a diversidade bacteriana presente neste biofilme usando métodos moleculares independentes de cultura baseados na clonagem do gene 16S rRNA. Serão selecionados quinze indivíduos com PAgL e quinze indivíduos com saúde periodontal (S). Medidas de profundidade de sondagem, (PS), nível clínico de inserção, sangramento à sondagem (SS), sangramento gengival, acúmulo de placa supragengival e supuração serão mensurados em 6 sítios por dente. Nos indivíduos com PAgL, serão coletadas amostras de placa subgengival de 2 sítios subgengivais, sendo um sítio com PS> 6mm e um sítio com PS < 3mm que não apresente SS. Nos indivíduos com saúde periodontal será coletado 1 sítio subgengival com PS < 3mm como controle. O DNA de todas as amostras será extraído. Inicialmente, a presença de amostras de Aggregatibacter actinomycetemcomitans de máxima e mínima leucotoxicidade será avaliada por reação em cadeia da polimerase (PCR) para todas as amostras. Posteriomente, o gene 16S rRNA será amplificado usando o par de iniciadores universais para Bactéria 9F e 1525R. Os genes amplificados serão clonados, e cerca de 50 clones para cada amostra serão seqüenciados e identificados comparando com o banco de dados de seqüências 16S rRNA. Cerca de 2000 clones serão seqüenciados em todo o estudo. Dendogramas serão construídos para verificar a posição filogenética de cada espécie e analisar a diversidade bacteriana presente no ambiente subgengival de indivíduos com doença periodontal agressiva localizada. (AU)