Uso da citometria de fluxo na análise dos efeitos de alterações morfo-funcionais de sêmen refrigerado e congelado sobre a fertilidade em equinos

• Processo: 09/51107-4
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2010
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2013
• Área do conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Frederico Ozanam Papa
• Beneficiário: Frederico Ozanam Papa
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Assunto(s): Fertilização Sêmen animal Equinos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Citometria De Fluxo | Dna | Equino | Fertilidade | Fluorescencia | Semen

Resumo

O objetivo deste trabalho será determinar as alterações morfo-funcionais ocorridas durante os processos de refrigeração e congelação em relação aos índices de fertilidade do sêmen equino. Serão utilizados seis garanhões com qualidade e congelabilidade seminal conhecidas e classificadas em alta, média e baixa. De cada animal serão colhidos cinco ejaculados para cada experimento e estes serão submetidos a análise computadorizada de motilidade do sêmen (CASA) e citometria de fluxo para integridade de membranas plasmática e acrossomal, função mitocondrial, translocação de fosfolipídios de membrana, índice de ativação de caspase e fragmentação de DNA. No experimento 1 será utilizado sêmen fresco in natura destes garanhões e as análises serão realizadas às 0h, 1h, 2h e 3h após a colheita. No experimento 2 será utilizado sêmen refrigerado a 15°C e a 5°C, ambos diluídos em Botu-Sêmen® na proporção de 2:1, e avaliados às 0h, 24h, 48h, 72h de refrigeração. No experimento 3 será utilizado sêmen congelado avaliado imediatamente após a descongelação (0min) e após 60min. No experimento 4 serão realizados testes de fertilidade conforme dados gerados nos experimentos anteriores. Assim, será efetuada uma classificação com base na qualidade individual do sêmen dos animais estudados em relação ao tipo de metodologia empregada na manipulação do sêmen, separando as amostras em alta, média e baixa morfo-funcionalidade para cada biotecnologia empregada. Dessa forma, pode-se gerar uma expectativa de prenhez de um animal e o melhor tipo de biotecnologia de sêmen a ser empregada para maximizar seu potencial reprodutivo (experimento 5). Para a análise estatística do efeito dos tratamentos nas amostras de sêmen, será realizado o cálculo das médias (X) e desvio padrão (DP) para os parâmetros avaliados, com análise de variância em blocos aleatórios e contrastes entre médias pelo método Tukey. Para avaliar a correlação entre as características de motilidade computadorizada do sêmen in natura, refrigerado a 15°C e 5°C e congelado-descongelado e as variáveis integridade de membranas plasmática e acrossomal, função mitocondrial, translocação de fosfolipídeos" de membrana, ativação da caspase e fragmentação de DNA, será realizado o teste de Spearman. Para análise dos resultados dos testes de fertilidade será utilizado o teste de Qui-Quadrado. Em todas as análises será adotado o nível de significância de 5% (P<0,05). (AU)