Caracterização de estados intermediários do enovelamento e obtenção de proteínas biofuncionais pela utilização de altas pressões hidrostáticas

• Processo: 10/13353-0
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2010
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2012
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
• Pesquisador responsável: Ligia Ely Morganti Ferreira Dias
• Beneficiário: Ligia Ely Morganti Ferreira Dias
• Instituição Sede: Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares (IPEN). Secretaria de Desenvolvimento Econômico (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Proteínas Proteínas recombinantes Escherichia coli
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Agregados | Alta pressão hidrostática | Corpos de inclusão | Renaturação de proteínas | Renaturação de proteínas

Resumo

Muitas das proteínas de valor biomédico relevante são encontradas em baixas concentrações em suas fontes nativas. Escherichia coli é um microorganismo muito útil não só para a produção de proteínas para estudos estruturais e funcionais, como também para preparação de proteínas de interesse terapêutico em grande escala. No entanto, a produção de proteínas recombinantes frequentemente resulta no acúmulo de agregados insolúveis (corpos de inclusão, CI), o que é um sério problema para a biotecnologia, pois dificulta a obtenção de proteínas bioativas. A aplicação de altas pressões é uma técnica branda de dissociação de proteínas agregadas e que possibilita a manutenção de estruturas secundária e terciária, útil para a renaturação de proteínas com obtenção de altos rendimentos de proteínas nativas. No presente projeto, desenvolveremos modelos de processo de renaturação de proteínas agregadas, utilizando altas pressões. Para tanto iremos realizar estudos de estabilidade e caracterização de estados intermediários no caminho do desenovelamento das proteínas hormônio de crescimento humano (hGH) e cruzaína e de enovelamento sob pressão. Estudaremos também as condições ideais de níveis de pressão, temperatura e tampão que propiciem a dissociação e posterior renaturação de Bcp, TrxA, TsnC e Ybbn de X. fastidiosa, PilB de X. axonopodis pv citri, SM29 de S. mansoni e GFP e das proteínas oligoméricas CTB e fiber knob de adenovirus para a aquisição de proteínas biofuncionais e com estrutura terciária nativa pela utilização de altas pressões hidrostáticas. Iremos também estudar as condições de cultivo das bactérias hospedeiras que levem à produção de CI facilmente dissociáveis. (AU)

Publicações científicas

(4)

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

MALAVASI, N. V.; CORDEIRO, Y.; RODRIGUES, D.; CHURA-CHAMBI, R. M.; LEMKE, L. S.; MORGANTI, L.. The effect of temperature on protein refolding at high pressure: Enhanced green fluorescent protein as a model. Process Biochemistry, v. 49, n. 1, p. 54-60, JAN 2014. (08/57338-5, 10/13353-0)

LEMKE, LAURA SIMONI; CHURA-CHAMBI, ROSA MARIA; RODRIGUES, DANIELLA; ROSA CUSSIOL, JOSE RENATO; MALAVASI, NATALIA VALLEJO; PIRES ALEGRIA, THIAGO GERONIMO; SOARES NETTO, LUIS EDUARDO; MORGANTI, LIGIA. Investigation on solubilization protocols in the refolding of the thioredoxin TsnC from Xylella fastidiosa by high hydrostatic pressure approach. Protein Expression and Purification, v. 106, p. 72-77, FEB 2015. (10/13353-0)

CHURA-CHAMBI, R. M.; CORDEIRO, Y.; MALAVASI, N. V.; LEMKE, L. S.; RODRIGUES, D.; MORGANTI, L.. An analysis of the factors that affect the dissociation of inclusion bodies and the refolding of endostatin under high pressure. Process Biochemistry, v. 48, n. 2, p. 250-259, FEB 2013. (10/13353-0)

RODRIGUES, D.; FARINHA-ARCIERI, L. E.; VENTURA, A. M.; CHURA-CHAMBI, R. M.; MALAVASI, N. V.; LEMKE, L. S.; GUIMARAES, J. S.; HO, P. L.; MORGANTI, L.. Effect of pressure on refolding of recombinant pentameric cholera toxin B. Journal of Biotechnology, v. 173, p. 98-105, MAR 10 2014. (10/13353-0)